Larva Lenf Bezi Diseksiyonu: Drosophila Hemosit Üreten Organın İzolasyonu
Published: April 30, 2023
Abstract
Kaynak: Reimels, T. A. ve Pfleger, C.M. Drosophila Larvalarında Lenf Bezi ve Hemositleri İnceleme Yöntemleri. J. Vis. Exp. (2016).
Bu video, sinek larvasında hematopoezisin birincil yeri olan Drosophila lenf bezini açıklar ve immünofizokimya ve floresan görüntüleme için organı parçalamak ve monte etmek için örnek bir protokol göstermektedir.
Protocol
Bu protokol Reimels ve Pfleger’den bir alıntıdır, Drosophila Larvalarında Lenf Bezi ve Hemositleri İnceleme Yöntemleri, J. Vis. Exp. (2016). 1. Larva Lenf Bezi İmmünohistok entrika NOT: Lenf bezi, sırt tarafındaki beynin biraz altında bir larvanın ön ucundan yaklaşık üçte bir uzunluğunda bulunur. (Şekil 1B’dekioka bakın.) Lenf bezi sırt damarını kuşat…
Representative Results
Şekil 1: In Vivo Kristal Hücre Melanizasyonu. A) Larvalar ısınmadan önce PCR tüplerine ayrı ayrı yerleştirildi. Kırmızı oklar, tüplerin dibinde olmayan larvaları gösterir. B) Isıtma sonrası tipik bir kristal hücre melanizasyon deseni, bazen lenf bezini ortaya çıkaran (ok; sırt tarafı gösterilmiştir, ön taraf bırakılır). Ölçek çubuğu 1 mm’yi temsil …
Materials
| PBS tablets | MP Biomedicals | 2810305 | |
| dissecting dish | Corning | 7220-85 | |
| microcentrifuge tube | Denville | C2170 | |
| silicone dissecting pad, made from Sylgard 184 kit | Krayden (distributed through Fisher) | NC9644388 (Fisher catalog number) | Made in petri dish by mixing components of Sylgard elastomer kit according to manufacturer instructions. |
| stereomicroscope | Morrell Instruments (Nikon distributor) | mna42000, mma36300 | Nikon models SMZ1000 and SMZ645 |
| tissue wipe | VWR | 82003-820 | |
| forceps | Electron Microscopy Sciences | 72700-DZ | |
| p200 pipette | Eppendorf | 3120000054 | |
| formaldehyde | Fisher | BP531-500 | |
| Triton | Fisher | BP151-500 | |
| Tween 20 | Fisher | BP337-500 | |
| bovine serum albumin | Rocky Mountain Biologicals | BSA-BSH-01K | |
| normal goat serum | Sigma | G9023-10ML | |
| normal donkey serum | Sigma | D9663-10ML | |
| 200 proof ethanol | VWR | V1001 | |
| N-propyl gallate | MP Biomedicals | 102747 | |
| glycerol | VWR | EM-4750 | |
| DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindole) | Fisher | 62248 | |
| microscope cover glass, 18 mm circular | Fisher | 12-545-100 | |
| glass microscope slides | Fisher | 22-034-980 | |
| 24-well plate | Corning | 351147 | |
| disposable transfer pipet | Fisher | 13-711-9AM | |
| fluorescence microscope | Zeiss | Axio Imager.Z1 |
Cite This Article
Larval Lymph Gland Dissection: Isolating the Drosophila Hemocyte-Producing Organ. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20117, doi: (2023).