Drosophila Voksen Brain Dissektion: En metode i Fly Neurobiologi

Abstract

Kilde: Kelly, S.M., et al. Dissektion og Immunofluorescent Farvning af Mushroom Body og Photoreceptor Neurons i Adult Drosophila melanogaster Brains. J. Vis. Exp. (2017).

Denne video beskriver, hvordan man dissekere og isolere den voksne Drosophila hjerne-en procedure, der er nødvendig for at visualisere organet, som ellers er skjult af kutikula, øje, og luftrør væv. Eksempelprotokollen viser en detaljeret demonstration, der giver præparater af høj kvalitet, der kan bruges til immunostaining og billeddannelsesmetoder i Drosophila neurobiologi.

Protocol

Denne protokol er et uddrag fra Kelly et al., Dissektion og Immunofluorescent Farvning af Mushroom Body og Photoreceptor Neurons i Adult Drosophila melanogaster Brains, J. Vis. Exp. (2017). 1. Forberedelse af dissektionsstation Placer stereomikroskopet og lyskilden med tilhørende fiberoptiske gåsehud på en stor bordplade. For at fremme rolige håndbevægelser og reducere hånd “ryste”, mens dissekere, er det vigtigt, at tilstrækkelig hånd og arm hvile…

Materials

Microdissection forceps/tweezers	Ted Pella	505-NM
Sylgard dishes	Living Systems Instrumentation	DD-50-S-BLK	Available from amazon.com
Na Phosphate Buffer monobasic	Sigma	S3139
Triton X 100	Sigma	X100-100ml
stereomicroscope	Leica S6D with KL300 LED light source
9-well dish (spot plate)	VWR	89090-482
35mm dish	Genesee Scientific	32-103
Sylgard	Fisher	50-366-794
Kimwipe	Fisher	06-666
PTN Buffer			0.1M NaPhosphate, pH 7.2, 0.1% Triton-X-100, Typically make up 0.5 L of 0.1M NaPhosphate buffer and aliquote 50ml at a time as needed