Deze video beschrijft hoe de volwassen Drosophila-hersenen kunnen worden ontleed en geïsoleerd – een procedure die nodig is voor het visualiseren van het orgaan, dat anders wordt verduisterd door de cuticula, het oog en het tracheaweefsel. Het voorbeeldprotocol toont een gedetailleerde demonstratie die hoogwaardige preparaten oplevert die kunnen worden gebruikt voor immunostaining- en beeldvormingsmethoden in de drosophila-neurobiologie.
Protocol
Dit protocol is een uittreksel uit Kelly et al., Dissectie en Immunofluorescente Kleuring van Mushroom Body en Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains, J. Vis. Exp. (2017). 1. Voorbereiding dissectiestation Plaats de stereomicroscoop en lichtbron met aangesloten glasvezel zwanenhalzen op een groot tafelblad. Om regelmatige handbewegingen te bevorderen en hand “schudden” tijdens het ontleden te verminderen, is het essentieel dat er vol…
Materials
Microdissection forceps/tweezers
Ted Pella
505-NM
Sylgard dishes
Living Systems Instrumentation
DD-50-S-BLK
Available from amazon.com
Na Phosphate Buffer monobasic
Sigma
S3139
Triton X 100
Sigma
X100-100ml
stereomicroscope
Leica S6D with KL300 LED light source
9-well dish (spot plate)
VWR
89090-482
35mm dish
Genesee Scientific
32-103
Sylgard
Fisher
50-366-794
Kimwipe
Fisher
06-666
PTN Buffer
0.1M NaPhosphate, pH 7.2, 0.1% Triton-X-100, Typically make up 0.5 L of 0.1M NaPhosphate buffer and aliquote 50ml at a time as needed