Drosophila Volwassen hersendissectie: een methode in vliegneurobiologie

Abstract

Bron: Kelly, S.M., et al. Dissectie en immunofluorescente kleuring van mushroom body en fotoreceptor neuronen in volwassen drosophila melanogaster hersenen. J.Vis. Exp. (2017).

Deze video beschrijft hoe de volwassen Drosophila-hersenen kunnen worden ontleed en geïsoleerd – een procedure die nodig is voor het visualiseren van het orgaan, dat anders wordt verduisterd door de cuticula, het oog en het tracheaweefsel. Het voorbeeldprotocol toont een gedetailleerde demonstratie die hoogwaardige preparaten oplevert die kunnen worden gebruikt voor immunostaining- en beeldvormingsmethoden in de drosophila-neurobiologie.

Protocol

Dit protocol is een uittreksel uit Kelly et al., Dissectie en Immunofluorescente Kleuring van Mushroom Body en Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains, J. Vis. Exp. (2017). 1. Voorbereiding dissectiestation Plaats de stereomicroscoop en lichtbron met aangesloten glasvezel zwanenhalzen op een groot tafelblad. Om regelmatige handbewegingen te bevorderen en hand “schudden” tijdens het ontleden te verminderen, is het essentieel dat er vol…

Materials

Microdissection forceps/tweezers	Ted Pella	505-NM
Sylgard dishes	Living Systems Instrumentation	DD-50-S-BLK	Available from amazon.com
Na Phosphate Buffer monobasic	Sigma	S3139
Triton X 100	Sigma	X100-100ml
stereomicroscope	Leica S6D with KL300 LED light source
9-well dish (spot plate)	VWR	89090-482
35mm dish	Genesee Scientific	32-103
Sylgard	Fisher	50-366-794
Kimwipe	Fisher	06-666
PTN Buffer			0.1M NaPhosphate, pH 7.2, 0.1% Triton-X-100, Typically make up 0.5 L of 0.1M NaPhosphate buffer and aliquote 50ml at a time as needed