Este video describe cómo diseccionar y aislar el cerebro adulto de Drosophila, un procedimiento necesario para visualizar el órgano, que de otra manera está oscurecido por la cutícula, el ojo y el tejido traqueal. El protocolo de ejemplo muestra una demostración detallada que produce preparaciones de alta calidad que se pueden utilizar para métodos de inmunodetención e imágenes en neurobiología de Drosophila.
Protocol
Este protocolo es un extracto de Kelly et al., Dissection and Immunofluorescent Staining of Mushroom Body and Photoreceptor Neurons in Adult Drosophila melanogaster Brains, J. Vis. Exp. (2017). 1. Preparación de la estación de disección Coloque el estereomicroscopio y la fuente de luz con cuellos de ganso de fibra óptica unidos en una gran sobremesa. Para promover movimientos constantes de las manos y reducir el “agitación” de las manos mientras se di…
Materials
Microdissection forceps/tweezers
Ted Pella
505-NM
Sylgard dishes
Living Systems Instrumentation
DD-50-S-BLK
Available from amazon.com
Na Phosphate Buffer monobasic
Sigma
S3139
Triton X 100
Sigma
X100-100ml
stereomicroscope
Leica S6D with KL300 LED light source
9-well dish (spot plate)
VWR
89090-482
35mm dish
Genesee Scientific
32-103
Sylgard
Fisher
50-366-794
Kimwipe
Fisher
06-666
PTN Buffer
0.1M NaPhosphate, pH 7.2, 0.1% Triton-X-100, Typically make up 0.5 L of 0.1M NaPhosphate buffer and aliquote 50ml at a time as needed