Mechanische verwijdering van Chorion en Vitelline-membraan: een methode om Drosophila-oöcyten voor te bereiden op directe observatie

Abstract

Bron: Perkins, A. T., Bickel, S. E. Using Fluorescence In Situ Hybridization (FISH) to Monitor the State of Arm Cohesion in Prometaphase and Metaphase I Drosophila Oocytes. J.Vis. Exp. (2017).

Deze video beschrijft een methode om de chorion- en vitellinemembranen mechanisch te verwijderen uit eerder vaste volwassen Drosophila-oöcyten. Het aanbevolen protocol toont een gedetailleerde demonstratie van de procedure die oöcyten oplevert die compatibel zijn met fluorescerende in situ hybridisatietesten.

Protocol

Dit protocol is een fragment uit Perkins and Bickel, Using Fluorescence In Situ Hybridization (FISH) to Monitor the State of Arm Cohesion in Prometaphase and Metaphase I Drosophila Oocytes, J. Vis. Exp. (2017). 1. Verwijdering van Chorions en Vitelline Membranen OPMERKING: Zie figuur 1 voor het benodigde gereedschap. Aparte late stadium oöcyten <…

Representative Results

Figuur 1: Cytologie tools. Hulpmiddelen gebruikt in protocol: (1) paar tangen (#5 Dumont); 2) wolfraamnaald; (3) diepe put schotel met deksel; (4) ondiepe glazen ontleedschaal; (5) getrokken Pasteur pipet. Klik hier om een grotere versie van deze afbeelding te bekijken. <img alt="Figure 2" class="xfigim…

Materials

Bovine serum albumin (BSA)	Fisher Scientific	BP1600-100	Prepare 10% stock Freeze aliquots
10% Triton X-100	Thermo Scientific	28314	Surfact-Amps
PBSBTx			1X PBS, 0.5% BSA, 0.1% Trition X-100
Forceps	Dumont		#5 INOX, Biologie
9" Disposable glass Pasteur pipettes	Fisher	13-678-20C	Autoclave to sterilize
Shallow glass dissecting dish			Custom made
Deep well dish (3 wells)	Pyrex	7223-34
Tungsten needle			homemade
Frosted glass slides, 25 x 75 mm	VWR Scientific	48312-002
15 mL conical tubes	Various
500 µl microfuge tubes	Various
Kimwipes	Various		disposable wipes