Rimozione meccanica della membrana corionica e vitellina: un metodo per preparare gli ovociti drosophila per l'osservazione diretta

Abstract

Fonte: Perkins, A. T., Bickel, S. E. Utilizzando l’ibridazione in situ a fluorescenza (FISH) per monitorare lo stato di coesione delle braccia negli ovociti prometafase e metafase I Drosophila . J. Vis. Exp. (2017).

Questo video descrive un metodo per rimuovere meccanicamente le membrane corali e vitelline dagli ovociti Drosophila maturi precedentemente fissati. Il protocollo in primo piano mostra una dimostrazione dettagliata della procedura che produce ovociti compatibili con i test di ibridazione in situ fluorescenti.

Protocol

Questo protocollo è un estratto da Perkins e Bickel, Using Fluorescence In Situ Hybridization (FISH) to Monitor the State of Arm Cohesion in Prometaphase and Metaphase I Drosophila Oocytes, J. Vis. Exp. (2017). 1. Rimozione dei colinoni e delle membrane vitelline NOTA: Vedere la figura 1 per gli strumenti necessari. Ovociti separati in fase avanzata <…

Representative Results

Figura 1: Strumenti di citologia. Strumenti utilizzati nel protocollo: (1) coppia di forcep (#5 Dumont); 2) ago di tungsteno; (3) piatto profondo con copertura; 4) sezionare il vetro superficiale; (5) pipetta Pasteur tirata. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura. <img alt…

Materials

Bovine serum albumin (BSA)	Fisher Scientific	BP1600-100	Prepare 10% stock Freeze aliquots
10% Triton X-100	Thermo Scientific	28314	Surfact-Amps
PBSBTx			1X PBS, 0.5% BSA, 0.1% Trition X-100
Forceps	Dumont		#5 INOX, Biologie
9" Disposable glass Pasteur pipettes	Fisher	13-678-20C	Autoclave to sterilize
Shallow glass dissecting dish			Custom made
Deep well dish (3 wells)	Pyrex	7223-34
Tungsten needle			homemade
Frosted glass slides, 25 x 75 mm	VWR Scientific	48312-002
15 mL conical tubes	Various
500 µl microfuge tubes	Various
Kimwipes	Various		disposable wipes