Nagelbandsstörning: En metod för att samla hemolymf från Drosophila Larver

Abstract

Källa: Reimels, T. A. och Pfleger, C.M. Metoder för att undersöka lymfkörteln och hemocyterna i Drosophila Larver . J. Vis. Exp. (2016).

Drosophila hemolymph fungerar som både blod och interstitiell vätska, cirkulerar i hela kroppen under larven och vuxna stadier. Denna video beskriver ett protokoll för att samla larv hemolymph för att kvantifiera de cirkulerande cellerna.

Protocol

Detta protokoll är ett utdrag från Reimels och Pfleger, Metoder för att undersöka lymfkörteln och hemocyterna i Drosophila Larvae, J. Vis. Exp. (2016). 1. Cirkulerande hemocytkoncentration För att få larver av ungefär samma utvecklingsstadium för denna analys, begränsa äggsamlingen genom att tillåta kvinnor att lägga ägg under en fast tidsperiod på 2- 6 timmar. Samla larver i dissekerande diskbrunnar fyllda med 1x fosfatbuffrad saltlösning …

Materials

PBS tablets	MP Biomedicals	2810305
dissecting dish	Corning	7220-85
microcentrifuge tube	Denville	C2170
silicone dissecting pad, made from Sylgard 184 kit	Krayden (distributed through Fisher)	NC9644388 (Fisher catalog number)	Made in petri dish by mixing components of Sylgard elastomer kit according to manufacturer instructions.
stereomicroscope	Morrell Instruments (Nikon distributor)	mna42000, mma36300	Nikon models SMZ1000 and SMZ645
tissue wipe	VWR	82003-820
forceps	Electron Microscopy Sciences	72700-DZ
p200 pipette	Eppendorf	3120000054
Countess Automated Cell Counter	Invitrogen	C10227
Countess cell counting chamber slides	Invitrogen	C10283
hemocytometer	Hausser Scientific	3200
trypan blue stain	Life Technologies	T10282