دودة واحدة PCR: طريقة لاستخراج وتضخيم الحمض النووي الجينومي
Published: April 30, 2023
Abstract
المصدر: بريور، ه.، وآخرون. خط أنابيب سريع وسهل لتوليد المسوخ نقطة الجينوم في C. elegans باستخدام CRISPR/Cas9 ريبونوكليوبروتس. ج. فيس إكسب. (2018).
يصف هذا الفيديو تقنية لفحص النيماتودا المفرد بسرعة للحصول على علامة جينية عن طريق فحص PCR. في بروتوكول المثال ، نقوم بفحص تحرير الجينوم القائم على CRISPR.
Protocol
البروتوكول التالي هو مقتطف من Prior et al, خط أنابيب سريع وسهل لتوليد المسوخ نقطة الجينوم في C. elegans باستخدام CRISPR/Cas9 ريبونوكليوبروتس, J. Vis. Exp. (2018). دودة واحدة PCR و جينوتيبينج بعد 1 – 2 أيام من وضع البيض، ونق?…
Representative Results
الشكل 1 – الأرقام 1- الأرقام التي يمكن أن هندسة CRISPR-Cas9 منموقعC. eleganssod-1. (أ)رسم تخطيطي يصور بنية exon-intron للجراد sod-1 في C. elegans. يشير الشريط الأحمر إلى موقع G93 في exon 3. تتم الإشارة إلى مجموعة زو?…
Materials
| Nuclease-free water | Synthego Inc. | provided with the sgRNA kit EZ kit | |
| KCl | Sigma | P5405 | |
| DNA Clean & Concentrator | Zymo Research | D4004 | |
| Zymoclean Gel DNA Recovery Kit | Zymo Research | D4002 | |
| Q5 Hot Start High-Fidelity 2X Master Mix | New England Biolabs | M0494L | |
| Proteinase K | Sigma | P2308 | |
| MgCl2 | Sigma | M2393 | |
| NP-40 | Sigma | 74385 | |
| Tween-20 | Fisher Scientific | BP337-100 | |
| RNaseZap Decontamination Solution | Fisher Scientific | AM9780 |
Cite This Article
Single Worm PCR: A Method to Extract and Amplify Genomic DNA. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20133, doi: (2023).