دودة واحدة PCR: طريقة لاستخراج وتضخيم الحمض النووي الجينومي

Published: April 30, 2023

Abstract

المصدر: بريور، ه.، وآخرون. خط أنابيب سريع وسهل لتوليد المسوخ نقطة الجينوم في C. elegans باستخدام CRISPR/Cas9 ريبونوكليوبروتس. ج. فيس إكسب. (2018). 

يصف هذا الفيديو تقنية لفحص النيماتودا المفرد بسرعة للحصول على علامة جينية عن طريق فحص PCR. في بروتوكول المثال ، نقوم بفحص تحرير الجينوم القائم على CRISPR.

Protocol

البروتوكول التالي هو مقتطف من Prior et al, خط أنابيب سريع وسهل لتوليد المسوخ نقطة الجينوم في C. elegans باستخدام CRISPR/Cas9 ريبونوكليوبروتس, J. Vis. Exp. (2018). دودة واحدة PCR و جينوتيبينج بعد 1 – 2 أيام من وضع البيض، ونق?…

Representative Results

الشكل 1 – الأرقام 1- الأرقام التي يمكن أن هندسة CRISPR-Cas9 منموقعC. eleganssod-1. (أ)رسم تخطيطي يصور بنية exon-intron للجراد sod-1 في C. elegans. يشير الشريط الأحمر إلى موقع G93 في exon 3. تتم الإشارة إلى مجموعة زو?…

Materials

Nuclease-free water Synthego Inc. provided with the sgRNA kit EZ kit
KCl Sigma P5405
DNA Clean & Concentrator Zymo Research D4004
Zymoclean Gel DNA Recovery Kit Zymo Research D4002
Q5 Hot Start High-Fidelity 2X Master Mix New England Biolabs M0494L
Proteinase K Sigma P2308
MgCl2 Sigma M2393
NP-40 Sigma 74385
Tween-20 Fisher Scientific BP337-100
RNaseZap Decontamination Solution Fisher Scientific AM9780

Play Video

Cite This Article
Single Worm PCR: A Method to Extract and Amplify Genomic DNA. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20133, doi: (2023).

View Video