PCR תולעת אחת: שיטה לחלץ ולהגביר DNA גנומי

Published: April 30, 2023

Abstract

מקור: פריור, ח’, ואח ‘. צינור מהיר ומפואר ליצירת מוטנטים של נקודה גנומית ב- C. elegans באמצעות CRISPR/Cas9 ריבונוקלאופרוטאינים. ג’יי ויס אקספ. (2018). 

וידאו זה מתאר טכניקה לסנן במהירות נמטודה אחת עבור סמן גנטי על ידי הקרנת PCR. בפרוטוקול לדוגמה, אנו מסננים לעריכת גנום מבוסס CRISPR.

Protocol

הפרוטוקול הבא הוא קטע מתוך Prior et al, צינור מהיר ומפואר ליצירת מוטנטים של נקודה גנומית ב- C. elegans באמצעות CRISPR /Cas9 ריבונוקלאופרוטאינים, J. Vis. Exp. (2018). PCR של תולעת יחידה וגנוטיפינג לאחר 1 – 2 ימים של הטלת ביצי…

Representative Results

איור 1. הנדסת CRISPR-Cas9 של לוקוס C. eleganssod-1. (A) איור סכמטי המתאר את מבנה האקסון-אינטרונים של הלוקוס סוד-1 ב- C. elegans. הסרגל האדום מציין את המיקום של G93 באקסון 3. ערכת זוג פריימר מצוין על ידי החצים…

Materials

Nuclease-free water Synthego Inc. provided with the sgRNA kit EZ kit
KCl Sigma P5405
DNA Clean & Concentrator Zymo Research D4004
Zymoclean Gel DNA Recovery Kit Zymo Research D4002
Q5 Hot Start High-Fidelity 2X Master Mix New England Biolabs M0494L
Proteinase K Sigma P2308
MgCl2 Sigma M2393
NP-40 Sigma 74385
Tween-20 Fisher Scientific BP337-100
RNaseZap Decontamination Solution Fisher Scientific AM9780

Play Video

Cite This Article
Single Worm PCR: A Method to Extract and Amplify Genomic DNA. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20133, doi: (2023).

View Video