PCR de un solo gusano: un método para extraer y amplificar el ADN genómico

Abstract

Fuente: Prior, H., et al. Una tubería rápida y facile para generar mutantes de punto genómico en C. elegans usando CRISPR/Cas9 Ribonucleoproteins. J. Vis. (2018). 

Este video describe una técnica para examinar rápidamente un solo nematodo para un marcador genético mediante la detección de PCR. En el protocolo de ejemplo, examinamos la edición del genoma basada en CRISPR.

Protocol

El siguiente protocolo es un extracto de Prior et al, A Rapid and Facile Pipeline for Generating Genomic Point Mutants in C. elegans Using CRISPR/Cas9 Ribonucleoproteins, J. Vis. Exp. (2018). PCR de un solo gusano y Genotipado Después de 1 – 2 días de puesta de huevos, transfiera el F1s a tapas individuales de tubo de tira PCR que contenga…

Representative Results

Figura 1. Ingeniería CRISPR-Cas9 del locus C. eleganssod-1. (A) Ilustración esquemática que representa la estructura exon-intron del locus sod-1 en C. elegans. La barra roja denota la ubicación del G93 en exon 3. El conjunto de pares de imprimación se anota en las flechas rojas (F1-R1). (B) Alineación de s…

Materials

Nuclease-free water	Synthego Inc.	provided with the sgRNA kit EZ kit
KCl	Sigma	P5405
DNA Clean & Concentrator	Zymo Research	D4004
Zymoclean Gel DNA Recovery Kit	Zymo Research	D4002
Q5 Hot Start High-Fidelity 2X Master Mix	New England Biolabs	M0494L
Proteinase K	Sigma	P2308
MgCl2	Sigma	M2393
NP-40	Sigma	74385
Tween-20	Fisher Scientific	BP337-100
RNaseZap Decontamination Solution	Fisher Scientific	AM9780