PCR à ver unique : une méthode pour extraire et amplifier l’ADN génomique

Published: April 30, 2023

Abstract

Source : Prieur, H., et autres. Un pipeline rapide et facile pour générer des mutants de point génomique dans C. elegans utilisant CRISPR/Cas9 Ribonucleoproteins. J. Vis. Exp. (2018). 

Cette vidéo décrit une technique pour dépister rapidement un nématode unique pour un marqueur génétique par dépistage PCR. Dans le protocole d’exemple, nous dépisterons l’édition du génome basée sur CRISPR.

Protocol

Le protocole suivant est un extrait de Prior et coll ., A Rapid and Facile Pipeline for Generating Genomic Point Mutants in C. elegans Using CRISPR/Cas9 Ribonucleoproteins, J. Vis. Exp. (2018). PCR à ver unique et génotypage Après 1 à 2 jours de ponte, transférer le F1s dans des bouchons individuels de tubes à bande PCR contenant 7 μL…

Representative Results

Figure 1. CRISPR-Cas9 ingénierie dulocus C. eleganssod-1. (A) Illustration schématique représentant la structure exon-intron du locus sod-1 dans C. elegans. La barre rouge indique l’emplacement du G93 dans l’exon 3. L’ensemble de paire d’amorce est noté par les flèches rouges (F1-R1). (B) Aligneme…

Materials

Nuclease-free water Synthego Inc. provided with the sgRNA kit EZ kit
KCl Sigma P5405
DNA Clean & Concentrator Zymo Research D4004
Zymoclean Gel DNA Recovery Kit Zymo Research D4002
Q5 Hot Start High-Fidelity 2X Master Mix New England Biolabs M0494L
Proteinase K Sigma P2308
MgCl2 Sigma M2393
NP-40 Sigma 74385
Tween-20 Fisher Scientific BP337-100
RNaseZap Decontamination Solution Fisher Scientific AM9780

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Cite This Article
Single Worm PCR: A Method to Extract and Amplify Genomic DNA. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20133, doi: (2023).

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