PCR à ver unique : une méthode pour extraire et amplifier l’ADN génomique
Published: April 30, 2023
Abstract
Source : Prieur, H., et autres. Un pipeline rapide et facile pour générer des mutants de point génomique dans C. elegans utilisant CRISPR/Cas9 Ribonucleoproteins. J. Vis. Exp. (2018).
Cette vidéo décrit une technique pour dépister rapidement un nématode unique pour un marqueur génétique par dépistage PCR. Dans le protocole d’exemple, nous dépisterons l’édition du génome basée sur CRISPR.
Protocol
Le protocole suivant est un extrait de Prior et coll ., A Rapid and Facile Pipeline for Generating Genomic Point Mutants in C. elegans Using CRISPR/Cas9 Ribonucleoproteins, J. Vis. Exp. (2018). PCR à ver unique et génotypage Après 1 à 2 jours de ponte, transférer le F1s dans des bouchons individuels de tubes à bande PCR contenant 7 μL…
Representative Results
Figure 1. CRISPR-Cas9 ingénierie dulocus C. eleganssod-1. (A) Illustration schématique représentant la structure exon-intron du locus sod-1 dans C. elegans. La barre rouge indique l’emplacement du G93 dans l’exon 3. L’ensemble de paire d’amorce est noté par les flèches rouges (F1-R1). (B) Aligneme…
Materials
| Nuclease-free water | Synthego Inc. | provided with the sgRNA kit EZ kit | |
| KCl | Sigma | P5405 | |
| DNA Clean & Concentrator | Zymo Research | D4004 | |
| Zymoclean Gel DNA Recovery Kit | Zymo Research | D4002 | |
| Q5 Hot Start High-Fidelity 2X Master Mix | New England Biolabs | M0494L | |
| Proteinase K | Sigma | P2308 | |
| MgCl2 | Sigma | M2393 | |
| NP-40 | Sigma | 74385 | |
| Tween-20 | Fisher Scientific | BP337-100 | |
| RNaseZap Decontamination Solution | Fisher Scientific | AM9780 |
Cite This Article
Single Worm PCR: A Method to Extract and Amplify Genomic DNA. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20133, doi: (2023).