Drosophila Optogenetics: En metode til at manipulere neuronale kredsløb
Published: April 30, 2023
Abstract
Kilde: de Vries, S. E., Clandinin, T. Optogenetic Stimulation af Escape Behavior i Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (2013).
Optogenetics gør det muligt at bruge lys til at manipulere neuroner, der er genetisk manipuleret til at udtrykke specifikke opsins-lysfølsomme proteiner, hvis lysaktivering udløser en ændring i neuronens tilstand. Her beskriver vi en optogenetisk tilgang i Drosophila ved hjælp af opsin Channelrhodopsin2. Eksempelprotokollen indeholder en optogenetics assay indstillet til at studere neuronale kredsløb bag fluens flugtadfærd.
Protocol
Denne protokol er et uddrag fra de Vries og Clandinin, Optogenetic Stimulation of Escape Behavior i Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2013). 1. Generer Channelrhodopsin Fluer Cross UAS-ChR2 flyver med Gal4 føreren efter eget valg, vi bruger G105-Gal4, som udtrykkes i Foma-1 neuroner i den optiske lap. For at eliminere muligheden for en visuel reaktion på det blå lys stimulation, begge flyve linjer er i en w+norpA baggrund. Slu…
Representative Results
Figur 1: Eksperimentel opsætning, der viser platformen med den lodrette holder og de fire kølearme, der holder kølelegeme med LED-arrays fastgjort til dem. (A)Opsætningen under omgivende belysning. (B) Opsætningen, når LED’erne lyser. (C) Et nærbillede af en Tri-Star LED på kølelegemet. (D) Et nærbillede af Tri-Star med tri-linsen fastgjort. <st…
Materials
| Reagent | |||
| All-trans Retinal | Advance Scientific Chemical Inc | R3041 | |
| Equipment | |||
| Heat Sink 9.2 C/W | Luxeonstar | LPD30-30B | 30 mm square X 30 mm high |
| Carclo 18° Tri-Lens | Luxeonstar | 10507 | |
| Blue Rebel LED on Tri-Star Base | Luxeonstar | MR-B0030-20T | 470 nm, 174 lm @ 700 mA. |
| 700 mA BuckPuck DC Driver | Luxeonstar | 3021-D-E-700 | |
| Wiring Harness for BuckPuck Driver | Luxeonstar | 3021-HE | |
| Pre-cut thermal adhesive tape | Luxeonstar | LXT-S-12 | 20 mm Hex Base |
| Snap-Loc Coolant Hose, ¼" ID | McMaster-Carr | 5307K49 | |
| Snap-Loc Coolant Hose Connector | McMaster-Carr | 5307K39 | ¼" NPT Male |
| Laboratory Grade Switching Mode Programmable DC Power Supply | BK Precision | 1698 | |
| Exilim camera | Casio | EX-FH20 |
Cite This Article
Drosophila Optogenetics: A Method to Manipulate Neuronal Circuits. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20149, doi: (2023).