Drosophila Optogenetics: En metode til at manipulere neuronale kredsløb

Published: April 30, 2023

Abstract

Kilde: de Vries, S. E., Clandinin, T. Optogenetic Stimulation af Escape Behavior i Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (2013).

Optogenetics gør det muligt at bruge lys til at manipulere neuroner, der er genetisk manipuleret til at udtrykke specifikke opsins-lysfølsomme proteiner, hvis lysaktivering udløser en ændring i neuronens tilstand. Her beskriver vi en optogenetisk tilgang i Drosophila ved hjælp af opsin Channelrhodopsin2. Eksempelprotokollen indeholder en optogenetics assay indstillet til at studere neuronale kredsløb bag fluens flugtadfærd.

Protocol

Denne protokol er et uddrag fra de Vries og Clandinin, Optogenetic Stimulation of Escape Behavior i Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2013). 1. Generer Channelrhodopsin Fluer Cross UAS-ChR2 flyver med Gal4 føreren efter eget valg, vi bruger G105-Gal4, som udtrykkes i Foma-1 neuroner i den optiske lap. For at eliminere muligheden for en visuel reaktion på det blå lys stimulation, begge flyve linjer er i en w+norpA baggrund. Slu…

Representative Results

Figur 1: Eksperimentel opsætning, der viser platformen med den lodrette holder og de fire kølearme, der holder kølelegeme med LED-arrays fastgjort til dem. (A)Opsætningen under omgivende belysning. (B) Opsætningen, når LED’erne lyser. (C) Et nærbillede af en Tri-Star LED på kølelegemet. (D) Et nærbillede af Tri-Star med tri-linsen fastgjort. <st…

Materials

Reagent
All-trans Retinal Advance Scientific Chemical Inc R3041
Equipment
Heat Sink 9.2 C/W Luxeonstar LPD30-30B 30 mm square X 30 mm high
Carclo 18° Tri-Lens Luxeonstar 10507
Blue Rebel LED on Tri-Star Base Luxeonstar MR-B0030-20T 470 nm, 174 lm @ 700 mA.
700 mA BuckPuck DC Driver Luxeonstar 3021-D-E-700
Wiring Harness for BuckPuck Driver Luxeonstar 3021-HE
Pre-cut thermal adhesive tape Luxeonstar LXT-S-12 20 mm Hex Base
Snap-Loc Coolant Hose, ¼" ID McMaster-Carr 5307K49
Snap-Loc Coolant Hose Connector McMaster-Carr 5307K39 ¼" NPT Male
Laboratory Grade Switching Mode Programmable DC Power Supply BK Precision 1698
Exilim camera Casio EX-FH20

Play Video

Cite This Article
Drosophila Optogenetics: A Method to Manipulate Neuronal Circuits. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20149, doi: (2023).

View Video