Introduction
ऐसी त्वचा, हृदय और गुर्दे के रूप में ठोस अंगों के प्रत्यारोपण अब दुनिया भर में चिकित्सा अभ्यास 1 में एक मानक प्रक्रिया है. सफलतापूर्वक प्रत्यारोपित अंगों दाता के प्रमुख उतक अनुरूपता एंटीजन को पहचानता है जो प्राप्तकर्ता प्रतिरक्षा प्रणाली के सक्रियण द्वारा अस्वीकार कर दिया जा सकता है. इसलिए प्रत्यारोपित रोगियों immunosuppressive दवाओं 2 के साथ इलाज की जरूरत है. चूहों में allogeneic त्वचा प्रत्यारोपण 1955 में Medawar और उनके सहयोगियों द्वारा स्थापित और बाद में प्रमुख उतक अनुरूपता परिसर (MHC) वर्ग मैं और द्वितीय के रूप में वर्णित लक्षित अणुओं की पहचान करने के लिए उपयोगी था. तब से, त्वचा प्रत्यारोपण मॉडल लगातार संशोधित और टी सेल सबसेट की भूमिका और भ्रष्टाचार अस्वीकृति 2-4 दबाने में रासायनिक और जैविक हस्तक्षेप की प्रासंगिकता का अध्ययन करने के लिए अनुकूलित किया गया है. कान और ट्रंक से त्वचा तैयार करने के लिए और अधिक कठिन हैं और पूंछ त्वचा 5 से हाइपोक्सिया और नेक्रोसिस के लिए अतिसंवेदनशील होते हैं; हालांकि,प्रत्यारोपण प्रक्रिया के समान है. इसके अलावा पूंछ त्वचा प्रत्यारोपण की निगरानी के कारण त्वचा की विशेषता बाल बनावट के लिए आसान है.
इस अनुच्छेद के सीडी 4 + टी सेल की मध्यस्थता allograft अस्वीकृति और चूहों में सहिष्णुता के विभिन्न पहलुओं के अध्ययन के लिए अनुमति देता है कि MHC वर्ग द्वितीय बेमेल पूंछ त्वचा प्रत्यारोपण के लिए एक विस्तृत प्रक्रिया प्रदान करता है. (आइए bm12 कहा जाता है) MHC वर्ग द्वितीय अणु आइए बी में प्राकृतिक तीन सूत्री उत्परिवर्तन 6-9 C57BL 6 / चूहों 8 में त्वचा allografts की अस्वीकृति को प्रेरित करने के लिए पर्याप्त है. आइए bm12 अणु विभिन्न αβ टी सेल रिसेप्टर Vα2Vβ8-TCR विशेष टी कोशिकाओं को एक TCR ट्रांसजेनिक माउस 10 उत्पन्न करने के क्रम में पहचान की गई है, जो बीच C57BL 6 / चूहों से (TCR) चेन, साथ सीडी 4 + टी कोशिकाओं को सक्रिय. Vα2Vβ8-TCR विशेष टी कोशिकाओं के दत्तक हस्तांतरण immunodeficient C57B में एक अस्वीकृति मॉडल स्थापित करने के लिए इस्तेमाल किया गया हैएल / 6 Rag2 - / - आइए bm12 त्वचा के साथ प्रतिरोपित चूहों.
दाता और प्राप्तकर्ता के बीच आनुवंशिक अंतर प्रत्यारोपण स्वीकृति और अस्वीकृति के परिणाम को प्रभावित. प्रत्यारोपण के विभिन्न प्रकार के होते हैं: autografts प्राप्तकर्ता व्यक्ति से ही प्रत्यारोपण कर रहे हैं; syngrafts और allografts क्रमशः आनुवंशिक रूप से समान और आनुवंशिक रूप से असंबंधित व्यक्तियों से प्रत्यारोपण कर रहे हैं. विभिन्न अल्लोजीनिक अंग प्रत्यारोपण की स्वीकृति रोगियों और माउस मॉडल 11,3,4 में रासायनिक और जैविक हस्तक्षेप से प्रदर्शित किया गया है. एक बुनियादी दृष्टिकोण में, विरोधी CD3 एंटीबॉडी का इलाज C57BL 6 / चूहों आइए bm12 पूंछ त्वचा (अप्रकाशित डेटा) की लंबे समय तक अस्तित्व दिखाया. कोशिकाओं प्राप्तकर्ता चूहों में प्रत्यारोपण से पहले सीडी 4 + और सीडी 8 + टी की कमी MHC वर्ग मैं और द्वितीय बेमेल grafts (12 में रेव) की स्वीकृति में हुई. दिलचस्प है, त्वचा grafts की अस्वीकृति सीडी 4 + की उपस्थिति पर निर्भर करता है (12 में रेव). इस मॉडल में, विनियामक टी कोशिकाओं के साथ एंटीबॉडी या दमन के साथ costimulatory अणुओं को अवरुद्ध करके अलग प्रतिरक्षा कोशिकाओं के बीच विशेष बातचीत को लक्षित सहिष्णुता (अप्रकाशित डेटा) उत्पन्न हो सकता है. दरअसल, CD40 और CD28 दोनों अवरुद्ध लंबे समय तक त्वचा allograft सहिष्णुता 13,14 के लिए नेतृत्व किया.
पूंछ त्वचा प्रत्यारोपण के अन्य अंगों के प्रत्यारोपण की तुलना में प्रदर्शन करने के लिए आसान और निगरानी करने के लिए आसान है. इसके अलावा, पूंछ त्वचा प्रत्यारोपण आसानी से तैयार कर रहे हैं और अन्य त्वचा के ऊतकों की तुलना में ischemia के लिए कम संभावना है. इंजेक्शन anesthetics के विपरीत, प्रत्यारोपण के दौरान संवेदनाहारी गैस (isofluorane) के उपयोग की प्रक्रिया और प्राप्तकर्ता वसूली समय दोनों shortens. अधूरा घाव भरने और भ्रष्टाचार अस्वीकृति का कारण हो सकता है जो पूंछ त्वचा प्रत्यारोपण के कर्लिंग, ऊतक चिपकने के आवेदन करने से रोका जाता है. इसके अलावा, आइए bm12 पूंछ त्वचा प्रत्यारोपण मॉडल विशेष रूप से सीडी 4 को सक्रिय इस प्रोटोकॉल रासायनिक और जैविक हस्तक्षेप के लिए अनुमति देता है कि एक विश्वसनीय प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य और आसानी से नजर रखी माउस मॉडल का वर्णन करता है. मॉडल पूंछ त्वचा प्रत्यारोपण की अस्वीकृति और सहिष्णुता प्रेरण की जांच के लिए करना है.
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Protocol
इस वीडियो प्रकाशन और प्रोटोकॉल में, सभी पशु प्रक्रियाओं केंटन प्राधिकरण बेसल स्टैड, स्विट्जरलैंड द्वारा अनुमोदित पशु प्रोटोकॉल के अनुसार आयोजित किया गया. बाँझ शर्तों जहां संभव में सभी प्रक्रियाओं का प्रदर्शन.
सर्जरी 1. तैयारी
- सभी सर्जिकल उपकरणों आटोक्लेव और उपयोग करने से पहले धुंध.
- गर्म पैड गर्मी और मेज (सामग्री / तरीकों की टेबल) पर सर्जिकल उपकरणों का आयोजन.
- उंगली पट्टी पट्टियाँ खोलें. (धुंध पूरी तरह से कवर किया जाता है बनाना) एक कपास झाड़ू के साथ घाव पैड पर पेट्रोलियम जेली लागू करें.
- चूहों का वजन और analgesia Buprenorphine 0.05 मिलीग्राम / किग्रा शरीर के वजन प्रशासन. नोट: यह तुरंत प्रत्यारोपण के बाद analgesia प्रदान करेगा.
ट्रांसप्लांटेशन के लिए तेल त्वचा के 2. तैयारी
- सीओ 2 asphyxiation और डी प्रति दाता चूहों (जैसे, आइए bm12) euthanizeछांटना पहले कीटाणुशोधन समाधान के साथ पूंछ isinfect.
- एक साफ प्लास्टिक के बोर्ड पर काली पट्टी नीचे के साथ पूंछ स्थिति और मध्य लाइन भर अनुलंबीय यह कटौती, केवल त्वचा की परत से जुड़े एक सतही चीरा.
- मनोरंजक संदंश का उपयोग पूंछ से त्वचा से खींचो.
- 10 मिलीलीटर HBSS के साथ भरा एक 10 सेमी सेल संस्कृति डिश में पूंछ त्वचा रखो.
3. सर्जिकल प्रक्रिया
- एक पारदर्शी प्रेरण बॉक्स में एक 3% isofluorane समाधान की साँस लेना द्वारा प्राप्तकर्ता चूहों (जैसे, C57BL / 6) anesthetize. नोट: माउस शल्य चिकित्सा विमान संज्ञाहरण तक पहुँचने के लिए यह 3-5 मिनट लगते हैं. संज्ञाहरण के तहत जबकि सूखापन को रोकने के लिए आंखों पर पशु चिकित्सक मरहम का प्रयोग करें.
- गर्म पैड पर माउस रखें और पैर की अंगुली pinching द्वारा प्रत्येक जानवर पलटा एक मुँह मुखौटा और गधे के माध्यम से 1.5% isofluorane लागू होते हैं.
- प्राप्तकर्ता चूहों के पृष्ठीय साइट (जैसे, C57BL / 6) दाढ़ी और एक सूखी धुंध दप का उपयोग contaminating बाल हटानेएबी.
- सड़न रोकनेवाला समाधान के साथ मुंडा प्रत्यारोपण साइट कीटाणुरहित.
- पीठ की सही / मध्यम साइट में संदंश के साथ त्वचा चुटकी और लगभग 1 एक्स 0.6 सेमी का एक दौर चीरा बनाने के लिए घुमावदार कैंची का उपयोग करें.
- खून बह रहा होता है, तो एक बाँझ कपास झाड़ू के साथ घाव साफ.
- चीरा के आकार का मूल्यांकन और स्केलपेल का उपयोग पूंछ त्वचा से अनुमानित आकार का एक प्रत्यारोपण काटा.
- प्रत्यारोपण के दौर के कोनों ट्रिम.
- एक बाँझ कपास झाड़ू पर छुरी, HBSS के शुष्क अतिरिक्त पर प्रत्यारोपण लोड और प्राप्तकर्ता माउस के भ्रष्टाचार बिस्तर में जगह है.
- दाता और मेजबान त्वचा की ओवरलैपिंग से बचें और विशेष रूप से संपर्क क्षेत्र पर ऊतक चिपकने वाला लागू होते हैं.
- माउस कमर के चारों ओर क्रीज बिना एक प्लास्टर लागू करें.
- माउस के लिए प्लास्टर ठीक करने के लिए चिपकने वाला गैर लोचदार पट्टी लागू (3 मिमी स्थानांतरित कर दिया).
- पट्टी की ऊपरी उदर साइट में 3 मिमी के बारे में कैंची से काटकर अलग कर देना. नोट: यह टीआर से बचने के लिए हैवसूली चरण के दौरान माउस के दांतों की apping.
- संवेदनाहारी मुँह मुखौटा निकालें और जाग जब तक हीटिंग पैड पर प्रतिरोपित चूहों रहते हैं.
- पूरी तरह से ठीक ही है जब उनके पिंजरों में प्रत्यारोपित चूहों पर लौटें और पट्टी भी तंग नहीं है कि यह सुनिश्चित करने के लिए अपनी गतिशीलता का आकलन करें.
- अगले सर्जरी के साथ आगे बढ़ने से पहले 70% इथेनॉल के साथ सभी सर्जिकल उपकरणों जीवाणुरहित.
4. पोस्ट ऑपरेटिव देखभाल
- पीने का पानी (4 मिलीग्राम / एमएल) के लिए पैरासिटामॉल युक्त सिरप जोड़ें और 7 दिनों के लिए प्रशासन.
- यह ठीक हो गया है एक बार पशु कमरे के लिए माउस लौटें.
- बारीकी पट्टी जगह (1 सप्ताह) में है समय के लिए अवसाद या अन्य व्यवहार में बदलाव (खाने या गतिहीनता), असामान्य उपस्थिति (संवारने की कमी) या आसन (pilo-निर्माण या hunched आसन) सहित नैदानिक संकेत के लिए चूहों की निगरानी.
5. पट्टी निकालना (6-7 दिन के बाद प्रत्यारोपण)
- Anesएक पारदर्शी प्रेरण बॉक्स (ऊपर देखें) में 3% isofluorane समाधान की साँस लेना द्वारा thetize चूहों.
- धमनी कैंची से पट्टी और प्लास्टर कट और ध्यान से उन्हें हटा दें. नोट: प्रत्यारोपण साइट की खींच से बचें.
- नैदानिक संकेत के लिए प्रतिरोपित चूहों (4.3 देखें) पर नजर रखने और त्वचा grafts (1 टेबल) की अस्वीकृति के लिए स्कोर. नोट: भ्रष्टाचार स्कोर प्रणाली पृष्ठीय त्वचा की तुलना में पूंछ त्वचा पर विभिन्न बाल बनावट का फायदा उठाते हैं. प्रत्यारोपण और अपनी अस्वीकृति की उपस्थिति 3 ग्रेड में वर्गीकृत किया गया है. C57BL 6 / असुरक्षित चूहे की allogeneic त्वचा (MHC द्वितीय बेमेल, उदाहरण के लिए, आइए bm12) grafts आमतौर पर 12-15 दिनों के बाद प्रत्यारोपण (स्वयं के डेटा और 15-20) के भीतर खारिज कर रहे हैं.
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Representative Results
एक पहले दृष्टिकोण में C57BL 6 / चूहों आइए bm12 allografts और आइए ख syngrafts साथ प्रत्यारोपित किया गया. पट्टी हटाने के बाद, C57BL 6 / चूहों (चित्रा 1 ए) में संपर्क क्षेत्र के बंद होने के बिना घाव भरने के प्रकट संकेत grafts. पट्टी हटाने के बाद, सीडी 4 + टी सेल की मध्यस्थता सूजन, परिगलित क्षेत्रों की उपस्थिति (लाल धब्बे) और प्रत्यारोपण (चित्रा 1 बी सी, भरा चिह्न) के बाद 13 दिनों के भीतर C57BL 6 / चूहों में आइए bm12 allografts की अस्वीकृति के लिए नेतृत्व syngrafts जबकि अप करने के लिए 100 दिन (चित्रा 1 बी सी, खुले चिह्न) के लिए सहन कर रहे थे. इन आंकड़ों असुरक्षित C57BL 6 / चूहों में आइए bm12 grafts के तीव्र अस्वीकृति की प्रगति दिखा.
विभिन्न अध्ययनों से MHC वर्ग द्वितीय बेमेल पूंछ त्वचा की अस्वीकृति अल्लोजीनिक सीडी 4 + टी कोशिकाओं (12 में रेव) की मौजूदगी पर निर्भर करता है कि प्रदर्शित करता है. दरअसल, टी सेल की कमी CD3ε - / - </ Sup> चूहों और टी और बी कोशिकाओं की कमी Rag2 - / - चूहों पूरा घाव भरने दिखाया और C57BL 6 / चूहों (चित्रा 2) के 13 दिनों के भीतर grafts अस्वीकार कर दिया जबकि आइए bm12, 100 दिन (चित्रा 2) के लिए grafts सहन . आइए bm12 बेमेल पूंछ त्वचा की स्वीकृति गंभीर बीमारी विकृतियों के बिना एक माउस मॉडल में अल्लोजीनिक सीडी 4 + टी कोशिकाओं और उनके प्रेरक कार्यों के अध्ययन के लिए अनुमति देता है.
/ - है - और Rag2 - स्थापित CD3ε में सहिष्णुता को तोड़ने के लिए / - चूहों, सीडी 4 + टी कोशिकाओं adoptively हस्तांतरित किया गया: 2 एक्स 10 4 पॉलीक्लोनल C57BL 6 / सीडी 4 + टी कोशिकाओं (14 दिनों के भीतर आइए bm12 grafts की अस्वीकृति को प्रेरित करने के लिए पर्याप्त थे डेटा) नहीं दिखाया गया है. - / - 50,000 और 100,000 C57BL 6 / सीडी 4 + टी कोशिकाओं के हस्तांतरण CD3ε में भ्रष्टाचार अस्वीकृति की प्रक्रिया को तेज नहीं किया था और Rag2 - / - चूहों. इन आंकड़ों allogen की भूमिका को रेखांकिततीव्र त्वचा भ्रष्टाचार अस्वीकृति मॉडल में ईआईसी सीडी 4 + टी कोशिकाओं.
इस पूंछ त्वचा प्रत्यारोपण के मॉडल का लाभ सीडी 4 + टी कोशिकाओं की कार्य विश्लेषण आसानी से प्रतिजन विशेष सीडी 4 + टी कोशिकाओं के दत्तक हस्तांतरण के द्वारा किया जा सकता है. ट्रांसजेनिक एबीएम माउस 9 गैर विशिष्ट सीडी 4 + टी कोशिकाओं के प्रभाव के बिना सक्रियण और जनसंख्या की प्ररूपी व्यवहार को चित्रित करने के लिए एक आदर्श उपकरण माना जाता है. 13 दिन (चित्रा 3 बी) के भीतर चूहों - / - 2 एक्स 10 4 प्रतिजन विशेष एबीएम कोशिकाओं के हस्तांतरण Rag2 में आइए bm12 grafts की अस्वीकृति को प्रेरित करने के लिए पर्याप्त था. इसके अलावा, एबीएम कोशिकाओं को अलग करने के लिए आसान कर रहे हैं और Vα2Vβ8-TCR चेन (चित्रा -3 सी) की अभिव्यक्ति का उपयोग कर लगाया जा सकता है. - / - चूहों की जांच की गई आइए bm12 में साइटोकिन्स के एबीएम सेल प्रसार और उत्पादन Rag2 प्रतिरोपित. एबीएम कोशिकाओं extensi proliferatedeFluor670 कमजोर पड़ने परख (चित्रा 3 डी) द्वारा निर्धारित और एबीएम कोशिकाओं के ऊपर से 30% पीएमए उत्तेजना (चित्रा 3E) पर IFN-γ उत्पादित vely के रूप में.
साथ में ले ली, इन आंकड़ों अपेक्षाकृत कुछ अल्लोजीनिक सीडी 4 + टी कोशिकाओं न्यूनतम गंभीर विकृति के साथ अल्लोजीनिक टी कोशिकाओं के विश्लेषण के लिए इस मॉडल आदर्श प्रतिपादन, आइए bm12 त्वचा grafts की अस्वीकृति को प्रेरित करने के लिए आवश्यक हैं जो दिखाते हैं.
अल्लोजीनिक और syngeneic पूंछ त्वचा के साथ चूहों के चित्रा 1. ट्रांसप्लांटेशन. (ए) C57BL 6 / चूहों अल्लोजीनिक (आइए bm12) और syngeneic (आइए ख) पूंछ त्वचा (एन = 5 समूह प्रति) के साथ प्रत्यारोपित किया गया. चित्र दिन 7 पर पट्टी हटाने के बाद (सही) allografts (बाएं) और syngrafts वर्णन. (बी) स्कोरिंग और (सी)त्वचा की जीवित रहने की सुबह 7 से अस्वीकृति या अंतिम निगरानी (दिन 100) के दिन तक grafts. इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें.
. चित्रा 2 allografts चूहों में टी कोशिकाओं के अभाव में बर्दाश्त कर रहे हैं Rag2 की जीवन रक्षा -. / - आइए bm12 - C57BL / 6 में प्रत्यारोपित माउस त्वचा grafts, CD3ε - / - और Rag2 - / - चूहों (एन = 4-6 समूह के अनुसार) और अस्वीकार कर दिया और स्वीकार किए जाते हैं grafts के चित्रण. इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें.
. चित्रा 3 विरोधी आइए bm12 विशिष्ट सीडी 4 + टी कोशिकाओं को पैदा करना और भ्रष्टाचार अस्वीकृति दौरान IFN-γ उत्पादन (ए) स्कोरिंग और आइए bm12 पूंछ त्वचा Rag2 में grafts के (बी) के अस्तित्व -. / - चूहों (एन = 5) adoptively 2 एक्स 10 4 प्रतिजन विशेष एबीएम कोशिकाओं के साथ स्थानांतरित कर दिया. एबीएम कोशिकाओं proliferating के ट्रांसजेनिक एबीएम चूहों के लिम्फ नोड्स से अलग एबीएम कोशिकाओं (सी) Vα2Vβ8 धुंधला हो जाना. (डी) eFluor670 कमजोर पड़ने और (ई) IFN-γ उत्पादन PMA- . दत्तक एबीएम सेल हस्तांतरण (एन = 5 चूहों) के बाद सुबह 9 पर चूहों - / - आइए bm12 त्वचा grafted Rag2 के लिम्फ नोड्स से अलग एबीएम कोशिकाओं को प्रेरित करने के लिए यहां क्लिक करेंइस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने.
| भ्रष्टाचार स्कोर | विवरण |
| 3 + | कोई लाल क्षेत्रों और एक चमकदार काले रंग की पट्टी की उपस्थिति |
| 2 + | एक चमकदार काले रंग की पट्टी और सूखापन के छोटे लाल क्षेत्रों, नुकसान की सूरत |
| 1 + | बड़ी लाल क्षेत्रों की उपस्थिति, कोई काला धारी और सिकुड़न |
| 0 | भ्रष्टाचार अस्वीकृति 80% नेक्रोसिस के रूप में परिभाषित |
तालिका 1. भ्रष्टाचार स्कोर प्रणाली. प्रत्यारोपण और अपनी अस्वीकृति की उपस्थिति श्रेणियों हैपूंछ और पृष्ठीय त्वचा पर विभिन्न बाल बनावट का लाभ लेने, 3 ग्रेड में gorized.
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Discussion
त्वचा प्रत्यारोपण अस्वीकृति और टी कोशिकाओं पर निर्भर सहिष्णुता के अध्ययन के लिए एक व्यापक रूप से इस्तेमाल किया विधि है. त्वचा प्रत्यारोपण मॉडल स्थापित किया गया था, कई रूपांतरों और परिवर्तन लागू किया गया है. वर्णित प्रक्रिया में, आइए bm12 पूंछ त्वचा प्रत्यारोपण संवेदनाहारी गैस (isofluorane) का उपयोग किया जाता है. गैस संज्ञाहरण का उपयोग प्रत्यारोपित चूहों पर तनाव घटता है जो निष्पादन और चूहों वसूली का समय कम हो जाती है. प्रक्रिया कान या पृष्ठीय त्वचा के ऊतकों की तुलना में अधिक कर्ल करने के लिए जाता है, जो पूंछ त्वचा, ठीक करने के लिए ऊतक चिपकने वाला कार्यरत हैं. इसके अलावा यह इस कर्लिंग कम कर देता है और पृष्ठीय छांटना साइट पर पूंछ त्वचा की स्थिति में सुधार के रूप किनारों को काटने और trimming से पहले पूंछ त्वचा समतल करने के लिए महत्वपूर्ण है.
भ्रष्टाचार अस्वीकृति या स्वीकृति का मूल्यांकन करने के लिए यह टीआरए की स्कोरिंग की सुविधा के लिए भ्रष्टाचार के मध्य में (C57BL 6 / चूहों में जैसे,) काला पट्टी के साथ पूंछ त्वचा तैयार करने के लिए आवश्यक हैबालों की बनावट अंतर के आधार पर nsplants.
MHC वर्ग द्वितीय आइए bm12 अणु के उत्परिवर्तन विशेष रूप से (एक ही आनुवंशिक पृष्ठभूमि के) असुरक्षित और immunodeficient चूहों में सीडी 4 + टी कोशिकाओं को सक्रिय. एक ओर इस परिणाम की व्याख्या की सुविधा है, लेकिन दूसरी ओर यह सीडी 4 + टी कोशिकाओं के अध्ययन के लिए विधि की सीमा. अन्य टी सेल सबसेट, अन्य दानदाताओं से पूंछ त्वचा, जैसे, Balb / सी या डी बी चूहों में प्रत्यारोपित किया जा सकता है सहित आइए bm1 चूहों और विभिन्न आनुवंशिक पृष्ठभूमि सहित एक ही आनुवंशिक पृष्ठभूमि के लिए टी सेल सक्रियण विस्तार करने के लिए.
तीव्र अस्वीकृति अध्ययन में, हम MHC वर्ग द्वितीय नाली और चूहों में अंग अस्वीकृति का अध्ययन करने के अल्लोजीनिक सीडी 4 + टी कोशिकाओं की सक्रियता में स्वाभाविक रूप से होती उत्परिवर्तन से लाभ. C57BL 6 / चूहों ज्यादातर अध्ययनों उसी के अनुरूप है जो प्रत्यारोपण के बाद 14 दिनों के भीतर आइए bm12 त्वचा grafts अस्वीकार कर दियाएनजी आइए bm12 त्वचा 15-20 प्रत्यारोपण. इसके अलावा तीव्र अस्वीकृति मॉडल व्यापक रूप से जीन चूहों की कमी से सीडी 4 + टी कोशिकाओं की अल्लोजीनिक क्षमता का परीक्षण करने के लिए प्रयोग किया जाता है. दरअसल, IFN-γ - / - चूहों आइए bm12 त्वचा भ्रष्टाचार अस्वीकृति (अप्रकाशित डेटा और 16) में देरी देखी गई. एंटीबॉडी इसी देरी अस्वीकृति 15,17,18 अवरुद्ध करने में प्रशासन द्वारा IFN-γ अवरुद्ध. इस एजी पेश करने और endothelial कोशिकाओं (12 में रेव) पर MHC वर्ग द्वितीय अभिव्यक्ति की शुरुआत में IFN-γ की एक प्रमुख भूमिका का संकेत है. Perforin की कमी चूहों आइए bm12 त्वचा भ्रष्टाचार अस्वीकृति 21 देरी नहीं था, साइटोकिन्स की भूमिका अस्वीकृति के लिए अधिक महत्वपूर्ण हो रहा है. दरअसल, आईएल -6 प्रशासन संभवतः IFN-γ उत्पादन 15 downregulating द्वारा, लंबे समय तक भ्रष्टाचार के अस्तित्व में हुई. इसके अलावा, neutrophils आईएल -4 की कमी चूहों 19 में आइए bm12 त्वचा grafts की अस्वीकृति में एक प्रमुख भूमिका निभाने के लिए लग रहे हो 20 में है कि ABT-100 ब्लॉकों cytokine स्राव और देरी आइए bm12 भ्रष्टाचार अस्वीकृति अवलोकन से मजबूत है. असुरक्षित चूहे (अप्रकाशित डेटा) में विरोधी CD3 एंटीबॉडी देरी आइए bm12 त्वचा भ्रष्टाचार अस्वीकृति का प्रशासन. / - है - और Rag2 - / - चूहों को 100 दिनों के लिए अल्लोजीनिक त्वचा grafts स्वीकार इसके अलावा, हम टी सेल की कमी CD3ε दिखाया. इन चूहों में सहिष्णुता आसानी से बदला जा सकता है / असुरक्षित C57BL 6 / चूहों से सीडी 4 + टी कोशिकाओं के दत्तक हस्तांतरण से टूटी हुई है. स्थानांतरण 10 x 4 सीडी 4 + टी कोशिकाओं या प्रतिजन विशेष एबीएम कोशिकाओं दिन 14 के आसपास आइए bm12 भ्रष्टाचार अस्वीकृति प्रेरित करने के लिए पर्याप्त है 2. पृथक Vα2Vβ8 पॉजिटिव एबीएम कोशिकाओं हालांकि, अस्वीकृति से पहले लिम्फ नोड्स में व्यापक प्रसार और IFN-γ उत्पादन दिखाया अस्वीकृति मैं Abm12 एक्सप्रेस पर निर्भर थात्वचा भ्रष्टाचार में आयन.
संक्षेप में, यह माउस मॉडल अस्वीकृति या सहिष्णुता के दौरान कम टी सेल नंबर की सक्रियता का अध्ययन करने के लिए एक शानदार तरीका है. पूंछ त्वचा प्रत्यारोपण प्रदर्शन करने के लिए आसान है और एक गंभीर शारीरिक प्रभाव वसूल बिना टी कोशिकाओं की अल्लोजीनिक प्रतिक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए विभिन्न आनुवंशिक पृष्ठभूमि के साथ चूहों के लिए लागू किया जा सकता है. इसके अलावा, इस मॉडल को उत्पन्न या त्वचा भ्रष्टाचार सहिष्णुता तोड़ने कि रासायनिक और जैविक पदार्थ के साथ हस्तक्षेप के लिए आदर्श है.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Betadine standard solution | Mundipharma | ||
| Cotton swab | Carl Roth GmbH | 31025060 | |
| Dafalgan , UPSA | Bristol Myers Squibb UPSA | ||
| Hansaplast finger strips | Beierdorf AG | REF.76861 | |
| Histoacryl tissue adhesive | Braun | REF.1050052 | |
| Leukotape classic , 2 cm x 10 m | BSN Medical SAS | REF.02204-00 | |
| PBS, Phosphate Buffered Saline, pH 7.4 | Invitrogen | 10010015 | GIBCO |
| Sterile gauze, 5 x 5 cm, 8 ply | MaiMed GmbH | 21010 | |
| Narrow pattern forceps | FST | 11003-12 | |
| Fine iris scissor curved | FST | 14095-11 | |
| Fine iris scissor | FST | 14094-11 | |
| Mayo scissors | FST | 14010-15 | |
| Artery scissors ball tip 11.5 cm | FST | 14080-11 | |
| Tissue forceps | FST | 11021-14 | |
| Surgical blade No. 20 | Swann-Morton LTD | 3006 | Carbon steel |
| Surgical blade handles | Swann-Morton LTD | ||
| Syringe, 1 ml | ARTSANA | Disposable | |
| Temgesic, buprenorphine | ESSEX Chemie AG | 0.3 mg/ml | |
| Tissue Culture dishes 10 cm, 60.1 cm2 | TPP | ||
| Vaseline | Vifor SA | ||
| Warm pad | Solis | Type 223 |
References
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