Abstract
纳米是治疗，运用是在尺度纳米生物医学应用的颗粒的独特性能的一种新兴的形式。提高药物输送到最大限度的治疗效果，减少药物的副作用是一些当今纳米的基石。特别是纳米颗粒已经发现在癌症治疗中具有广泛的应用。纳米颗粒提供了高度的设计，应用，以及基于所述肿瘤微环境的生产灵活性预计为与快速翻译到临床实践更有效。聚合物胶束纳米载体药物输送应用的热门选择。
在本文中，我们描述了用于合成根据一个明确定义的两亲性线性树枝状共聚物（telodendrimer，TD）的自组装载药，二硫化交联的胶束一个简单而有效的协议。 TD是由聚乙烯GL的ycol（PEG）作为亲水性链段和硫醇化胆酸群集作为使用基于溶液的肽化学芯成形疏水部分附着逐步到胺封端的聚乙二醇。化疗药物，如紫杉醇（PTX），可以使用标准溶剂蒸发方法被加载。将O 2介导的氧化先前用于形成从上阵的游离巯基帧内胶束二硫化物交联。然而，反应缓慢，对于大规模生产是不可行的。最近，H 2 O 2介导的氧化方法进行了探讨作为一种更可行和有效的方法，它比以前报道的方法快96倍。使用这种方法，将50克的PTX加载，二硫化物交联的纳米颗粒已成功地生产具有窄粒度分布和高载药量的效率。将所得的胶束溶液的稳定性使用扰乱条件如共孵育瓦特分析了第i洗涤剂，十二烷基硫酸钠，有或没有还原剂。相比，他们的非交联的对应时，载药，二硫化交联的胶束显示出较少的溶血活性。
Introduction
纳米技术是受益了许多医学领域1的快速新兴领域。纳米颗粒提供用于设计和调节是不与其他类型的常规治疗剂的可行性的机会。纳米载体增强药物对生物降解的稳定性，延长药物的循环时间，克服药物的溶解度的问题，并且可以进行微调为靶向药物递送和用于共输送显像剂1,2。基于纳米粒子输送系统持有癌症成像和治疗的承诺。肿瘤脉管系统是泄漏到大分子，并可能导致在通过增强的渗透性和保留（EPR）效果3肿瘤部位循环纳米颗粒的优先积累。间正在积极进行作为抗癌药物载体的几个纳米载体（ 例如，脂质体，水凝胶，和聚合物胶束），聚合物胶束已超过第得到广泛普及Ë过去十年4,5。
聚合物胶束是一个热力学系统，该系统，在静脉内给药，可以潜在地稀释的临界胶束浓度（CMC）以下，从而导致它们的解离成unimers。交联的策略已被用于最小化胶束解离成unimers。但是，过分稳定胶束可以防止药物从靶部位释放，从而降低了整体的治疗效果。几种化学方法已被开发，以使交联降解响应于氧化还原或外界刺激，如还原的二硫键6,7-和pH裂解8或可水解酯键9,10。
我们以前曾报道了设计和由树突胆酸（CA）的块和线性聚乙二醇（PEG）共聚物，胶束纳米颗粒的合成称为末端树枝状聚合物（TD）11-15 了nK -CAy（其中n =分子量以千道尔顿（K），Y =（CA）的单位胆酸数）。他们封装药物的特点是体积小，保质期长，效率高，如疏水核心紫杉醇（PTX）和阿霉素（DOX）。 TD的积木，如PEG，赖氨酸，和CA，是生物相容的，和聚乙二醇电晕的存在可以赋予“隐形”纳米颗粒性质，防止胶束纳米颗粒的非特异性摄取被网状内皮系统。
巯基化线性树枝状聚合物可以很容易地通过引入半胱氨酸到我们的标准TD的树枝状寡聚赖氨酸骨干产生。本文介绍通过引入二硫键交联成阵的疏水性芯（ 图1）用于生产可逆交联的胶束药物递送系统的一个浅显协议。
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Protocol
伦理学声明：雌性无胸腺裸鼠（怒族/怒族株），6-8周龄，购然后根据指引AAALAC无病原体条件下保存，被允许适应环境之前的任何实验至少4天。根据协议号07-13119和09-15584号，由动物使用和注意事项管理咨询委员会在加州大学戴维斯分校的认可符合机构的指导方针所有的动物实验进行和。
1. TD PEG 5K -Cys合成4- -Ebes 8 -CA 8
- 在一个圆底烧瓶中，在10至20毫升无水二甲基甲酰胺（DMF）和冰浴的溶解的MeO-PEG 5K -NH 2（2克，0.4毫摩尔）。
- 在玻璃烧杯中，溶解3当量。的1-羟基-6-氯 - 苯并三唑三唑（HOBt），3当量。的N，N'-diisopropylcarbodiimide（DIC）和3当量。中基（Fmoc）2赖氨酸-OH在无水D-MF（10-15毫升）。搅拌在磁搅拌板上15-20分钟。
- 该混合物添加到包含的MeO-PEG 5K -NH 2.取下冰浴，在室温下过夜搅拌该反应混合物的反应烧瓶中。
- 确认薄层色谱（TLC）16和Kaiser试验17在反应完成后（黄色表明不存在游离NH 2）。加入大约200毫升冰冷的乙醚中反应烧瓶沉淀出聚合物产品1（的MeO-PEG 5K -Lys（NH-Fmoc基）2）。分离通过离心沉淀的聚合物（在6000 xg离心6分钟，4℃）。
- 要执行TLC，当场涂硅凝胶TLC板样品。使用二氯甲烷/甲醇（9：1）作为流动相。开发TLC板后观察紫外线灯下点。人们也可以使用茚三酮染色试剂来可视化在热板上胺斑点。
- 启SER的试验，放置在玻璃管含Kaiser的试剂样品的一点点。加热它在100℃下5分钟，并寻找变色（如果溶液的颜色保持黄色，然后将反应完成）。
- 重新溶解在无水DMF（10-20毫升）的产物，重复沉淀和离心（参见步骤1.4）。
- 重复步骤1.5，然后洗涤聚合物沉淀三次用冰冷的乙醚。
- 转移聚合物沉淀1到干净的反应烧瓶中并将烧瓶连接到高真空源以除去残留乙醚。
- 制备并加入大约20-30毫升的20％（体积/体积）-4-甲基哌啶在DMF中与聚合物中间体1。搅拌直至完全溶解。运行3小时的反应。
- 执行薄层16和Kaiser试验（蓝色证实游离NH 2存在下 ）17（参见步骤1.4），以确认completio反应的n个。如果反应已完成，则继续进行醚沉淀，如所提到产品的产品1（步骤1.4-1.6）。
- 干燥的聚合物产物2（的MeO-PEG 5K -Lys（NH 2）2）的真空下。
- 执行一个更圆基（Fmoc）2赖氨酸-OH-耦合到中间体2（步骤1.1-1.7）生成产物3（的MeO-PEG 5K -Lys（赖氨酸（NH-Fmoc基）2）2）。脱保护（步骤1.8-1.10）Fmoc基（4，的MeO-PEG 5K -Lys（赖氨酸（NH 2）2）2）和一对（步骤1.1-1.7）的基（Fmoc）赖氨酸（BOC）-OH向产生第三代树枝状聚赖氨酸（5，的MeO-PEG 5K -Lys赖氨酸-2 - （（Fmoc基）赖氨酸（BOC））4）终止对PEG链的一端4的Boc和Fmoc基团。
- 所得聚合物中间体5转移到反应烧瓶中。在如在二氯甲烷（DCM）1（V / V）三氟乙酸（TFA）：eparate反应烧瓶中，准备1。加15-20毫升1：1的TFA / DCM（体积/体积）混合物的聚合物中间体5。搅拌混合物直至聚合物完全溶解。搅拌另外3小时。
- 执行薄层16和Kaiser试验（蓝色证实游离NH 2存在下 ）17（参见步骤1.4），以确认反应完成。如果反应完全，蒸除聚合物在TFA / DCM混合物用空气，直到获得粘稠溶液。继续乙醚沉淀，提到产品1（步骤1.4-1.6）。干燥的聚合物产物6（的MeO-PEG 5K -Lys赖氨酸-2 - （（Fmoc基）赖氨酸（NH 2））4）在真空下。
- 转印聚合物中间体6到反应烧瓶中。使用约40毫升含8当量的无水DMF中。的N，N- -diisopropylethylamiNE（DIEA）以溶解聚合物中间体6。在玻璃烧杯中，溶解12当量。的HOBt，12当量。的DIC和12当量。中基（Fmoc）半胱氨酸（TRT）-OH在20-25毫升无水DMF的。振摇10-15分钟，然后将反应混合物加入到含有6反应烧瓶中。夜间运行的反应。
- 确认在用TLC 16和Kaiser试验反应完成（参见步骤1.4;黄色表示不存在的游离NH 2）17。如果反应已完成，则继续进行醚沉淀，如所提到产品的产品1（步骤1.4-1.6），以分离产物7（的MeO-PEG 5K -Lys赖氨酸-2 - （（Fmoc基）赖氨酸- （（Fmoc）保护的Cys （TRT）））4。
- 7执行的Fmoc脱保护，如在步骤1.8中概述，得到产物8（PEG 5K -Lys赖氨酸-2 - （赖氨酸（NH 2） - （半胱氨酸（NH 2）（TRT）））4）。情侣基（Fmoc）-PEG 2 -Suc-OH于聚合物使用上述用于添加HOBt过程中间/ DIC-介导的偶联（“EBES”连接子，24当量），得到中间体9（的MeO-PEG 5K -Lys赖氨酸2 -Lys 4 - （半胱氨酸（TRT） ）4（EBES（NH-Fmoc基））8）。
- 执行一个更圆的Fmoc脱保护的（步骤1.6-1.8），以获得中间10（的MeO-PEG 5K -赖赖氨酸2 -赖4 - （半胱氨酸（TRT））4（EBES（NH 2））8）。
- 转移聚合物中间体10到反应烧瓶中，并添加无水DMF（约30-40毫升）以溶解它。在另一反应烧瓶中，溶解24当量。的CAOSu（根据先前公开的方法制备的）的无水DMF（20-30毫升）18。添加48当量。的N，N-二异丙基乙胺，并让它搅拌10-15分钟。转移内容到含有10反应瓶中，让反应来看Øvernight。
- 确认在用TLC 16和Kaiser试验反应的完成（参见步骤1.4;黄色表示不存在的游离NH 2）17。如果反应已完成，则继续进行醚沉淀，如所提到产品的产品1（步骤1.4-1.6）以分离产物11（的MeO-PEG 5K -Lys赖氨酸2 -Lys 4 - （半胱氨酸（TRT））4 -Ebes 8 -CA 8）。透析它在去离子水和冻干的样品，得到白色粉末。
- 聚合物中间体11放置到反应烧瓶中。准备并加入20毫升TFA / 1,2-乙二硫醇（EDT）/三乙基硅烷（TIS）的/ H 2 O（94 / 2.5 / 1 / 2.5，V / V）混合物到聚合物溶液中。搅拌混合物，直至完全溶解。运行4小时的反应。确认通过TLC 16反应的完成。
- 根据通风柜，吹空气到聚合物-TFA / EDT / TIS / H 2Ø混合物，直到溶液变粘稠。继续到醚沉淀，如所提到产品的产品1（步骤1.4-1.6），以分离出最终产物，12（PEG 5K -Cys 4 -Ebes 8 -CA 8）。溶解于乙腈并冻干它，得到白色粉末。
2. PTX-胶束的制备
- 准备用标准蒸发方法的PTX-PEG装-半胱氨酸5K 4 -Ebes 8 -CA 8胶束。
- 溶解20毫克的TD与在1ml氯仿（ 三氯甲烷 ）不同量的PTX（1-9毫克）。使用旋转蒸发器，以得到均匀的，干燥的聚合物薄膜除去溶剂。重构用1ml通过涡旋磷酸盐缓冲盐水（PBS）的薄膜上，然后通过超声处理30分钟，在40千赫兹，如有必要，以允许载药胶束的形成。
- 添加6微升3％（W / W） 的 H 2 O 2（1当量到free值的硫醇基）氧化对TD的硫醇基团。一旦游离巯基的水平保持在恒定的低价值，通过埃尔曼的试验19所示使用作进一步鉴定胶束溶液。
- 筛选具有0.22μm的过滤器消毒的样品的溶液。分析药物的加入9倍乙腈和执行超声处理10分钟释放从胶束的药物后，在微胶粒加载的HPLC 20的系统上的量。使用C18柱与乙腈/水作为流动相HPLC。
- 根据HPLC面积值和药物标准11的浓度之间的校准曲线计算的药物负载。
注：装载效率被定义为药物的装载到胶束到初始药物含量的比率。
3.胶束的表征
- 测量的微米尺寸和尺寸分布icelles用动态光散射（DLS）仪器29。在室温下进行测量，并保持胶束浓度为1毫克/毫升。
注：要执行粒度分析，用PBS为空白，然后记录粒径为实际样品。取一式三份样品的读数，然后取平均读数。 - 使用荧光光谱测量的PEG 5K -Cys 4 -Ebes 8 -CA 8的临界胶束浓度（CMC）之前和芘交联作为疏水荧光探针后，如先前13,21说明。
注意：通常情况下，胶束浓度范围为5×10 -7至5×10 -4 M.
4.胶束的稳定性SDS有或无还原剂
- 制备十二烷基硫酸钠的储备溶液（SDS）溶液（7.5毫克/毫升），并在PBS二硫键交联的胶束（1.5毫克/毫升）。接下来，U唱储备溶液，使溶液混合物，其中最后的SDS浓度为2.5毫克/毫升和胶束浓度为1.0毫克/毫升。
- 测量的尺寸和尺寸分布在有或没有10毫谷胱甘肽（GSH）的存在预定的时间间隔的胶束溶液（如在步骤3.1中提到）。
5.溶血试验
- 评价PTX加载的，非交联的胶束（PTX-NCMS）的根据从收集的先前公布的程序11，并使用新鲜的柠檬酸化的血液从裸鼠PTX加载交联胶束（PTX-的DCMs）中制备的溶血潜在尾面纱。
- 收集红血球通过血样（1.0毫升）的离心分离在1000 xg离心10分钟，用PBS洗三次，然后重悬浮，用PBS将细胞沉淀到2％的终浓度。
- 混合200μl的红细胞悬浮液用不同浓度（0.2和1.0的毫克PTX-NCMS和PTX-的DCMs的/毫升）分别与在培养箱摇床孵育4小时，在37℃。
- 离心胶束红细胞的混合物在3000×g离心5分钟。转移100μl的所有样本的上清液至96孔板中。使用微板读数器测量游离血红蛋白在上清液的吸光度在540nm处。
注意：用Triton-100（2％）和PBS孵育红细胞将被用作阳性和阴性对照，分别。红细胞的百分比溶血计算公式如下：红细胞溶血=（OD 样品 - OD 阴性对照 ）/（OD 阳性对照 - OD 阴性对照 ）×100％。
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Representative Results
制备与表征载药，二硫化交联胶束
两亲性聚合物的PEG 5K -Cys 4 -Ebes 8 -CA 8能够形成用于癌症的药物递送二硫化物交联的胶束体系的树枝状聚合物。在结构上，它被定义为通过一个支链聚（赖氨酸半胱氨酸EBES）主链相连的线性PEG分子（亲水域，分子量5K）的一端胆酸（疏水性结构域）的树枝状低聚物。存在使用这些嵌段共聚物在其它报道胶束系统的几个优点。首先，它可容易地通过逐步溶液相缩合反应来合成。其次，相对于其他几个报告两亲聚合物，硫醇化聚合物系统，通过完善的溶液相分步的Fmoc肽化学制备具有良好定义的structu回覆。它可以存储在冷冻干燥粉末形式并具有延长的保质期。
几种技术可用于表征最终产物。附连到TD上胆酸的量可以通过对PEG的质子的信号比进行比较，以那些在1 H NMR谱胆酸的三个甲基被检测到。在TD的分子量可通过MALDI-TOF质谱法和凝胶渗透色谱（GPC）来确认。定量埃尔曼的测试可用于破译的本每分子游离半胱氨酸残基的数目。
PEG 5K -Cys 4 -Ebes 8 -CA 8可自组装以形成在水性介质中的胶束。使用标准溶剂蒸发方法，各种疏水性药物，如紫杉醇和长春新碱，已经成功地包封在微胶粒13,22。 Oxyg烯先前利用氧化PEG 5K -Cys 4 -Ebes 8 -CA 8的游离硫醇基团，并形成内胶束二硫化物交联键。如由埃尔曼的试验来监测，从游离的巯基的转化率，以二硫键后氧化48小时达到85％。 AH 2 O 2介导的氧化最近被作为一种替代方法。的转化率，30分钟（ 图2），这比以前的方法快96倍达到88％。五十克的PTX加载，二硫化物交联的纳米颗粒已成功使用这种更有效的方法（ 图3）产生的。的粒度为约27纳米，具有窄的粒度分布（ 图3）。载药效率接近100％，为4.0毫克/毫升的PTX加载。二硫化交联对管委会的价值产生巨大影响。相较于标准TD PEG 5K -CA 8缺乏二硫键交联的TD表明所观察到的CMC值的10倍的下降（5.53μM相对于0.67微米）13。
稳定性研究
我们进一步研究了对严重胶束破坏条件PTX加载，二硫化物交联的胶束的稳定性。十二烷基硫酸钠（SDS）]是常规用于评估胶束的稳定性，因为它可以有效地分解聚合物胶束强烈离子洗涤剂。载药，二硫化交联的胶束（1.0毫克/毫升）的稳定性通过DLS在胶束破坏的SDS（2.5毫克/毫升）的存在下监测。胶束的粒径保持一段时间稳定，这表明这样的交联的胶束保持完整（ 图4，左边小图）。还原条件预计裂解二硫键的疏水核心，疗法伊比使得胶束容易不稳定。谷胱甘肽（GSH），内源性还原剂，通常用于这类研究。有在谷胱甘肽的细胞内水平相比，细胞外水平（10毫米与2微米）形成鲜明的对比。在浓度这种差异常常用于生成刺激响应系统。在加入谷胱甘肽在细胞内的浓度（10mm）的23后，载药，二硫化交联的胶束的大小为30分钟保持完好。它们突然降低到1纳米，表示的二硫键，胶束（ 图4，右侧面板）的快速解离的先决条件的临界数量的减少。与此相反，该系统仍然谷胱甘肽的胞外浓度的存在下稳定（未示出数据）。
溶血研究
数字图5示出在PTX加载胶束，具有或不具有二硫键交联的所观察到的溶血活性的差异。施用这些颗粒到血流中时，必须避免血细胞溶血，因为它破坏了它们的治疗优点。造血-兼容性是基于聚合物的药物载体，如具有溶解脂质或自己插入磷脂膜，导致细胞膜的破裂的电位两亲阵的体内应用非常关键的。正如图5所示，PTX-NCMS中发现有剂量依赖的红细胞（RBC）溶胞计数，与溶血的从8.1％提高到14.2％为PTX-NCMS的浓度的比例为0.2毫克增加/ ml至1.0毫克/毫升。然而，PTX-的DCMs具有二硫键交联表现出相同的实验条件下，在红细胞没有可观察到的溶血活性（<1.0％）。这种差异在hemolys是趋势可以归因于存在于所述疏水性核心内胶束二硫键，这防止PTX-的DCMs从解离，以形成两亲阵。
图1： 用于形成交联的胶束的步骤。后的自组装的硫醇化telodendrimer PEG 5K -Cys 4 -Ebes 8 -CA 8的氧化形成的二硫化物交联的胶束的示意图。 请点击此处查看该图的放大版本。
图 2： 交联的胶束形成氧化的方法。 T的转换率他硫醇的达阵团体二硫键的氧化时间为两氧化法的功能。微胶粒的总浓度保持在20毫克/毫升。 请点击此处查看该图的放大版本。
图3： 载药，交联胶束。左板：间歇PTX加载，二硫化物交联的胶束的图片。比例尺：1英寸。右板：粒径，通过动态光散射（DLS）来测定。胶束的总浓度保持在20毫克/毫升。 PTX的负载量为4毫克/毫升。粒度数据被示出为平均粒径±SD基于三个测量。 SD：标准偏差，描述了测得的粒度分布的宽度。请点击此处查看该图的放大版本。
图4： 稳定性研究。 PTX加载，二硫化物交联的胶束的粒度为2.5毫克/毫升的SDS的存在下不具有（左）或具有（右）GSH（10毫米），如通过DLS测量的。粒度数据被示出为平均粒径±SD基于三个测量。 SD：标准偏差，描述了测得的粒度分布的宽度。 请点击此处查看该图的放大版本。
图5： 溶血试验。在比较PTX加载，二硫化物交联的胶束的体外溶血活性，以非交联的胶束对红血细胞（红细胞）。的Triton-100（2％）和PBS分别用作阳性和阴性对照。所报告的值是一式三份样品的平均值±标准差。 请点击此处查看该图的放大版本。
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Discussion
几个纳米颗粒已经研究了其在药物递送的潜在用途。脂质体阿霉素和紫杉醇（PTX）-loaded人血清白蛋白的纳米聚集体用于癌症治疗由FDA批准的纳米治疗剂之中。然而，虽然临床上有效的，这两种纳米治疗剂的在尺寸上相对“大”，他们往往在肝脏和肺蓄积。具有相对较小的颗粒尺寸和较高的药物装载容量高分子胶束正在出现用于药物递送的纳米载体。其独特的核 - 壳结构“”溶解“'通过物理包封在含水条件下的疏水药物分子。具有长的保质期和高效率在包封药物在我们的实验室形式单分散的纳米颗粒制备定义明确的阵（10-50毫微米粒径）组成的高分子胶束。之一的健壮的TD平台的许多优点之一是该聚合物的通用性。许多药物，荧光染料，和靶向配体可以很容易地掺入到TD平台13,15,24。
该议定书中的关键步骤
我们已经开发出一种健壮的，可逆的，二硫键交联的胶束为PTX输送，这是明确的，大约27纳米的粒度的系统，并且具有窄的粒度分布。该阵分别经由逐步溶液相肽化学合成。这些TD的明确定义的化学结构是用于产生具有所需性质的纳米粒子的关键因素。因此，在用TLC和Kaiser试验反应的完成是非常关键的。的H 2 O 2的氧化也是一个关键步骤，对TD的硫醇基被氧化，以形成二硫键交联，从而大大提高了胶束的稳定性。相比我们之前的基于氧的氧化方法中，H 2 O 2 -基于氧化方法是更快的96倍，从而在较短的时间周期提供交联的胶束。此外，谷胱甘肽，一含巯基的三肽，是由细胞产生的一种重要的抗氧化剂，并且它在清除自由基和活性氧的化合物的一个重要的角色。这使得通过维持细胞的氧化还原平衡做出了重大贡献。 GSH的细胞浓度的药物设计的一个有趣的方面。谷胱甘肽的细胞内浓度现在已经确立为比外浓度（10毫米与2微米，分别）25基本上更高。更重要的是，升高的细胞内谷胱甘肽水平经常被报道在许多耐药人和鼠肿瘤细胞26。谷胱甘肽的高细胞内分布有利于在药物的有效载荷的释放和积累的胶束和结果的二硫化物交联的断裂。二硫化物交联的纳米颗粒是稳定在SDS的存在。然而，富GSH-细胞内环境触发药物通过打破二硫键，从而去稳定系统中的释放。聚合物诱导溶血起因于血液成分，例如红细胞聚合物胶束的有害的相互作用。相比，非交联的类似物交联的胶束显示出小得多的溶血。
修改和故障排除
利用H 2 O 2作为氧化剂允许一个更有效的二硫键交联的形成相比于先前报道的，基于氧的方法13时。 的 H 2 O 2是一种强氧化剂27，其是廉价的和高度可溶于水和相对于其它一些已知的氧化剂（ 例如，铬酸盐或高锰酸盐）给出高品质的产品。然而，氧化时间，可能需要furtheř优化的基础上，合成的规模。
该技术的局限性
H 2 O 2是一种强氧化剂。即使使用用于进行二硫化物交联的形成的 H 2 O 2的浓度低，护理具有与装载有“氧化敏感”的药物，以防止不希望的药物降解阵使用时作出。
关于到现有/替代方法的技术意义
记载的技术是一种易于实验装置，可以在一个标准实验室可容易地复制。例如，使用标准的蒸镀法药物负载消耗相比，透析法的时间更少。使用H 2 O 2作为氧化剂在芯中的二硫键的形成是96倍比使用oxyg先前报道氧化方法更快EN 13。药物加载步骤的再现可以通过测量粒径（DLS法）和药物含量（HPLC）很容易地进行评估。
掌握这一技术后，未来的应用方向或
相比于小分子药物，需要的主要障碍之一，纳米中药之前，必须克服能够进入主流癌症治疗的设置是扩大生产28的技术挑战。掌握这种新开发的技术后，可以很容易地合成大规模二硫键交联的胶束。这是在人类患者中此纳米制剂的临床研究中非常希望的。
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| MeO-PEG5K-NH2 | Rapp Polymere | 125000-2 | |
| Fmoc-Lys(Fmoc)-OH | Aaptec | AFK107 | |
| Fmoc-Lys(Boc)-OH | Anaspec | AS-20132 | |
| Fmoc-Cys(Trt)-OH | Aapptec | AAC105 | |
| Dimethylformamide | Fisher Scientific | BP1160-4 | |
| Ethyl ether | Fisher Scientific | E134-20 | |
| N,N-Diisopropylethylamine | Sigma Aldrich | D125806 | |
| Trifluoroacetic acid | Sigma Aldrich | T6508 | Corrosive, handle with care |
| 4-methyl piperidine | Alfa-Aesar | L-02709 | |
| Ebes linker | Anaspec | AS-61924 | |
| Cholic acid | Sigma Aldrich | C1129 | |
| 1,2-Ethanedithiol | Sigma Aldrich | 02390 | Handle inside fume hood. Bleach gloves after usage. |
| Triisopropylsilane | Sigma Aldrich | 233781 | |
| Chloroform (anhydrous) | Sigma Aldrich | 288306 | |
| Hydrogen peroxide solution 30% | Aaron Industries | NA | |
| HoBt-Cl | Aaptec | CXZ096 | |
| DIC | Sigma Aldrich | D125407 | |
| Female athymic nude mice (Nu/Nu strain), 6–8 weeks age | Harlan (Livermore, CA) |
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