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Biochemistry

प्रतिवर्ती Disulfide क्रॉस से जुड़े micelles के उत्पादन के लिए एक सतही और कुशल दृष्टिकोण

Published: December 23, 2016 doi: 10.3791/54722
Automatic Translation
1,2, 1, 3
1Department of Biochemistry & Molecular Medicine, University of California, Davis, 2UC Davis Comprehensive Cancer Center, University of California, Davis, 3Department of Internal Medicine, Division of Hematology and Oncology, University of California, Davis

Abstract

Nanomedicine चिकित्सा कि कणों कि जैव चिकित्सा आवेदन के लिए पैमाने में नैनोमीटर हैं की अद्वितीय गुण harnesses के एक उभरते रूप है। दवा वितरण में सुधार चिकित्सीय परिणामों को अधिकतम करने और मादक पदार्थों से जुड़े दुष्प्रभावों को कम करने के लिए वर्तमान nanomedicine के cornerstones में से कुछ हैं। विशेष रूप से नैनोकणों कैंसर के इलाज में एक विस्तृत आवेदन मिल गया है। नैनोकणों कि डिजाइन, आवेदन, और ट्यूमर microenvironment पर आधारित उत्पादन में लचीलेपन का एक उच्च डिग्री प्रदान करते नैदानिक ​​व्यवहार में तेजी से अनुवाद के साथ और अधिक प्रभावी होने के लिए पेश कर रहे हैं। बहुलक micellar नैनो-वाहक दवा वितरण अनुप्रयोगों के लिए एक शानदार विकल्प है।

इस अनुच्छेद में, हम एक अच्छी तरह से परिभाषित amphiphilic रैखिक-वृक्ष के समान copolymer (telodendrimer, टीडी) की आत्म विधानसभा के आधार पर दवा भरी हुई, डाइसल्फ़ाइड पार से जुड़े micelles synthesizing के लिए एक सरल और प्रभावी प्रोटोकॉल का वर्णन। टीडी पॉलीथीन जीएल से बना हैycol (खूंटी) हाइड्रोफिलिक खंड और एक अमाइन समाप्त खूंटी करने के लिए कोर के गठन हाइड्रोफोबिक आधा भाग जुड़ी चरणबद्ध समाधान आधारित पेप्टाइड रसायन विज्ञान का उपयोग कर के रूप में एक Thiolated cholic एसिड क्लस्टर के रूप में। ऐसे पैक्लिटैक्सेल (PTX) के रूप में रसायन चिकित्सा दवाओं, एक मानक विलायक वाष्पीकरण विधि का उपयोग कर लोड किया जा सकता है। हे 2 मध्यस्थता ऑक्सीकरण पहले से टीडीएस पर मुक्त thiol समूहों से इंट्रा-micellar डाइसल्फ़ाइड पार लिंक के लिए फार्म का उपयोग किया गया था। हालांकि, प्रतिक्रिया धीमी गति से और बड़े पैमाने पर उत्पादन के लिए संभव नहीं था। हाल ही में, एक एच 2 ओ 2 मध्यस्थता ऑक्सीकरण विधि एक और अधिक व्यावहारिक और कुशल दृष्टिकोण के रूप में पता लगाया गया था, और यह 96 बार पहले की रिपोर्ट विधि की तुलना में तेजी से गया था। इस दृष्टिकोण का प्रयोग, PTX से भरी हुई है, डाइसल्फ़ाइड पार से जुड़े नैनोकणों की 50 ग्राम सफलतापूर्वक संकीर्ण कण आकार के वितरण और उच्च दवा लोडिंग क्षमता के साथ उत्पादन किया गया है। जिसके परिणामस्वरूप मिसेल समाधान की स्थिरता को इस तरह के सह-ऊष्मायन w के रूप में खलल न डालें शर्तों का उपयोग विश्लेषण किया जाता हैएक डिटर्जेंट, सोडियम सल्फेट dodecyl, के साथ या एक एजेंट को कम करने के बिना ith। जब उनके गैर-पार से जुड़े समकक्षों की तुलना में मादक पदार्थों से भरी हुई है, डाइसल्फ़ाइड पार से जुड़े micelles कम रक्तलायी गतिविधि का प्रदर्शन किया।

Introduction

नैनो एक तेजी से उभरता हुआ क्षेत्र है कि जैव चिकित्सा क्षेत्रों 1 के एक नंबर लाभ हुआ है। नैनोकणों डिजाइन और गुण है कि पारंपरिक चिकित्सा विज्ञान के अन्य प्रकारों के साथ संभव नहीं हैं ट्यूनिंग के लिए अवसर प्रदान करते हैं। नैनो वाहक बायो़डीग्रेडेशन के खिलाफ दवाओं की स्थिरता को बढ़ाने, लम्बा खींच दवा प्रचलन समय, दवा घुलनशीलता मुद्दों पर काबू पाने, और ठीक-देखते लक्षित दवा वितरण के लिए और सह पहुंचाने इमेजिंग एजेंट 1,2 के लिए हो सकता है। Nanoparticle आधारित वितरण प्रणाली कैंसर इमेजिंग और उपचार में वादा पकड़। ट्यूमर vasculatures अणुओं को टपकाया हैं और बढ़ाया पारगम्यता और प्रतिधारण (EPR) प्रभाव 3 माध्यम से ट्यूमर स्थलों पर नैनोकणों घूम के तरजीही संचय के लिए नेतृत्व कर सकते हैं। कई नैनो-वाहक (जैसे, liposomes, हाइड्रोजेल, और polymeric micelles) कि सक्रिय रूप से कैंसर रोधी दवाओं के लिए वाहक के रूप में चलाया जा रहा है के अलावा, बहुलक micelles वें ओवर में व्यापक लोकप्रियता हासिल की हैई पिछले एक दशक से 4,5।

Polymeric micelles एक thermodynamic प्रणाली है कि, नसों में प्रशासन पर, संभावित महत्वपूर्ण मिसेल एकाग्रता (सीएमसी) के नीचे पतला किया जा सकता, unimers में उनके हदबंदी के लिए अग्रणी रहे हैं। पार से जोड़ने की रणनीतियों unimers में micellar हदबंदी को कम से कम करने के लिए नियोजित किया गया है। हालांकि, जरूरत से ज्यादा स्थिर micelles लक्ष्य स्थलों पर रिहा, जिससे समग्र चिकित्सीय प्रभावकारिता को कम से दवा रोक सकता है। कई रासायनिक दृष्टिकोण बनाने के लिए लगाया गया है पार से जोड़ने रिडॉक्स के जवाब में या इस तरह के कम करने योग्य डाइसल्फ़ाइड बांड 6.7 और पीएच-cleavable 8 या hydrolysable एस्टर बांड 9,10 के रूप में बाहरी उत्तेजनाओं, के लिए degradable।

हम पहले से डिजाइन और micellar वृक्ष के समान cholic एसिड (सीए) ब्लॉक और रैखिक पॉलीथीन ग्लाइकोल (खूंटी) copolymers, से मिलकर नैनोकणों के संश्लेषण के रूप telodendrimers (टीडी) के लिए भेजा 11-15 सूचना दी है एन.के. -CAy (जहां kilodaltons (कश्मीर) में एन = आणविक वजन, y = (सीए) इकाइयों cholic एसिड की संख्या) के रूप में प्रतिनिधित्व कर रहे हैं। वे इस तरह के पैक्लिटैक्सेल (PTX) और हाइड्रोफोबिक कोर में डॉक्सोरूबिसिन (DOX) के रूप में encapsulating दवाओं में उनके छोटे आकार, लंबे समय तक शैल्फ जीवन, और उच्च दक्षता की विशेषता है। ऐसे खूंटी, लाइसिन, और सीए, के रूप में टीडी की इमारत ब्लॉकों, biocompatible रहे हैं, और एक खूंटी प्रभामंडल की मौजूदगी एक "चुपके" nanoparticle चरित्र प्रदान कर सकते हैं, रेटिक्युलोएंडोथीलियल सिस्टम के द्वारा micellar नैनोकणों के गैर विशिष्ट तेज रोकने।

Thiolated रैखिक-वृक्ष के समान पॉलिमर आसानी से हमारे मानक टीडीएस के वृक्ष के समान oligo-लाइसिन रीढ़ की हड्डी में cysteines शुरू करने से उत्पन्न किया जा सकता है। यह लेख (चित्रा 1) टीडीएस के हाइड्रोफोबिक कोर में डाइसल्फ़ाइड पार लिंक शुरू करने से एक reversibly पार से जुड़े micellar दवा वितरण प्रणाली के उत्पादन के लिए एक सतही प्रोटोकॉल प्रस्तुत करता है।

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Protocol

आचार बयान: महिला athymic नग्न चूहों (परमाणु / परमाणु तनाव), 6-8 सप्ताह पुरानी, ​​खरीदे गए थे और उसके बाद AAALAC दिशा निर्देशों के अनुसार रोगज़नक़ मुक्त शर्तों के अधीन रखा है और किसी भी प्रयोगों के लिए पहले कम से कम 4 दिनों के लिए जलवायु के अनुकूल बनाना करने के लिए अनुमति दी गई। सभी पशु प्रयोगों संस्थागत दिशा निर्देशों के अनुपालन में प्रदर्शन किया और प्रोटोकॉल नं 07-13119 और नंबर 09-15584, कैलिफोर्निया, डेविस विश्वविद्यालय में पशु उपयोग और देखभाल प्रशासनिक सलाहकार समिति ने मंजूरी दे दी के अनुसार किया गया।

1. टीडी खूंटी 5K -Cys के संश्लेषण 4 -Ebes 8 -CA 8

  1. एक दौर नीचे कुप्पी में, निर्जल dimethylformamide (DMF) और बर्फ पर ठंड का 10-20 मिलीलीटर में मेव-खूंटी 5K राष्ट्रीय राजमार्ग 2 (2 जी, 0.4 mmol) भंग।
  2. एक गिलास बीकर में, 3 equiv भंग। 1-हाइड्रोक्सी-6-क्लोरो benzotriazole (HOBt), 3 equiv की। एन की, एन '-diisopropylcarbodiimide (डीआईसी), और 3 equiv। की (Fmoc) 2 निर्जल डी में लिस, ओहम्यूचुअल फंड (10-15 मिलीलीटर)। एक चुंबकीय हलचल प्लेट पर 15-20 मिनट के लिए हलचल।
  3. प्रतिक्रिया युक्त मेव-खूंटी 5K राष्ट्रीय राजमार्ग 2. बर्फ स्नान निकालें और कमरे के तापमान पर रात भर प्रतिक्रिया मिश्रण हलचल फ्लास्क मिश्रण जोड़ें।
  4. पतली परत क्रोमैटोग्राफी (टीएलसी) 16 और कैसर की परीक्षा 17 के साथ प्रतिक्रिया के पूरा होने की पुष्टि करें (एक पीले रंग मुक्त राष्ट्रीय राजमार्ग 2 के अभाव इंगित करता है)। प्रतिक्रिया कुप्पी को ठंडा ईथर के लगभग 200 मिलीलीटर जोड़कर बहुलक उत्पाद 1 (मेव-खूंटी 5K -Lys (एनएच Fmoc) 2) वेग। अलग centrifugation के माध्यम से उपजी बहुलक (6000 XG पर 6 मिनट और 4 डिग्री सेल्सियस)।
    1. टीएलसी को करने के लिए सिलिका जेल लेपित टीएलसी प्लेटों पर नमूने हाजिर। क्लोराइड / मेथनॉल का उपयोग करें (9: 1) मोबाइल चरण के रूप में। टीएलसी प्लेटों के विकास के बाद एक यूवी दीपक के तहत स्पॉट का निरीक्षण करें। एक भी धुंधला अभिकर्मक ninhydrin का उपयोग एक गर्म थाली पर अमाइन स्पॉट कल्पना करने के लिए कर सकते हैं।
    2. काई के लिएसेवा का परीक्षण, ग्लास ट्यूब में नमूना कैसर की अभिकर्मक युक्त का एक छोटा सा जगह है। 5 मिनट के लिए 100 डिग्री सेल्सियस पर यह गर्मी और रंग परिवर्तन (यदि समाधान का रंग पीला रहता है, तो प्रतिक्रिया पूरा हो गया है) के लिए देखो।
  5. निर्जल DMF (10-20 मिलीलीटर) में उत्पाद फिर से भंग और वर्षा और centrifugation (1.4 कदम देखें) दोहराएँ।
  6. दोहराएँ कदम 1.5, और फिर ठंडा ईथर के साथ बहुलक वेग तीन बार धोएं।
  7. एक साफ प्रतिक्रिया फ्लास्क बहुलक वेग 1 स्थानांतरण और अवशिष्ट आकाश को दूर करने के लिए एक उच्च वैक्यूम फ्लास्क स्रोत के लिए कनेक्ट।
  8. तैयार है और 20% की लगभग 20-30 मिलीलीटर जोड़ने (वी / वी) DMF में 4-methylpiperidine मध्यवर्ती 1 बहुलक करने के लिए। पूरा विघटन जब तक हिलाओ। 3 घंटे के लिए प्रतिक्रिया चलाएँ।
  9. टीएलसी 16 प्रदर्शन और कैसर की टेस्ट (एक नीले रंग मुक्त राष्ट्रीय राजमार्ग 2 की उपस्थिति की पुष्टि) 17 (1.4 कदम देखें) completio पुष्टि करने के लिएप्रतिक्रिया के एन। प्रतिक्रिया पूरा हो गया है, तो के रूप में उत्पाद 1 (कदम 1.4-1.6) के लिए उल्लेख किया है, ईथर वर्षा करने के लिए आगे बढ़ें।
  10. बहुलक उत्पाद 2 (मेव-खूंटी 5K -Lys (एनएच 2) 2) एक वैक्यूम के अंतर्गत सूखी।
  11. मध्यवर्ती 2 पर (Fmoc) 2 लिस-ओह-युग्मन के एक और दौर के लिए बाहर ले (कदम 1.1-1.7) उत्पाद 3 उत्पन्न करने के लिए (मेव-खूंटी 5K -Lys (लिस (एनएच Fmoc) 2) 2)। डी-रक्षा (कदम 1.8-1.10) Fmoc समूह (4, मेव-खूंटी 5K -Lys (लिस (एनएच 2) 2) 2) और युगल (कदम 1.1-1.7) (Fmoc) लिस (बीओसी) ओह करने के लिए एक तीसरी पीढ़ी वृक्ष के समान polylysine उत्पन्न (5, मेव-खूंटी 5k -Lys-लिस 2 - ((Fmoc) लिस (बीओसी)) 4) खूंटी श्रृंखला के एक छोर पर चार बीओसी और Fmoc समूहों के साथ समाप्त हुई।
  12. एक प्रतिक्रिया कुप्पी के लिए जिसके परिणामस्वरूप बहुलक मध्यवर्ती 5 स्थानांतरण। के रूप मेंक्लोराइड (डीसीएम) में 1 (वी / वी) trifluoroacetic एसिड (टीएफए): eparate प्रतिक्रिया फ्लास्क, 1 तैयार करते हैं। बहुलक मध्यवर्ती 1 से 5 टीएफए / डीसीएम (वी / वी) मिश्रण एक 1: के 15-20 मिलीलीटर जोड़ें। मिश्रण हिलाओ जब तक बहुलक पूरी तरह से भंग कर रहा है। एक अतिरिक्त 3 घंटे के लिए हिलाओ।
  13. टीएलसी 16 प्रदर्शन और कैसर की परीक्षा 17 (1.4 कदम देखें) (एक नीले रंग मुक्त राष्ट्रीय राजमार्ग 2 की उपस्थिति की पुष्टि) प्रतिक्रिया के पूरा होने की पुष्टि करें। प्रतिक्रिया पूरा हो गया है, तो हवा के साथ बहुलक में टीएफए / डीसीएम मिश्रण लुप्त हो जाना जब तक एक चिपचिपा समाधान प्राप्त की है। के रूप में उत्पाद 1 (कदम 1.4-1.6) के लिए उल्लेख किया है, ईथर वर्षा करने के लिए आगे बढ़ें। एक वैक्यूम के तहत - (((Fmoc) लिस (एनएच 2)) 4 -Lys-लिस 2 मेव-खूंटी 5k) बहुलक उत्पाद 6 सूखी।
  14. स्थानांतरण बहुलक मध्यवर्ती 6 एक प्रतिक्रिया कुप्पी में। निर्जल 8 equiv युक्त DMF के लगभग 40 मिलीलीटर का प्रयोग करें। एन की, एन -diisopropylethylamiपूर्वोत्तर (DIEA) बहुलक मध्यवर्ती 6 भंग करने के लिए। एक गिलास बीकर में, 12 equiv भंग। HOBt की, 12 equiv। जिला उद्योग केंद्र, और 12 equiv की। की (Fmoc) Cys (ठ्ठ) निर्जल DMF का 20-25 मिलीलीटर में ओह। 10-15 मिनट के लिए हिला, और फिर प्रतिक्रिया 6 युक्त कुप्पी की प्रतिक्रिया मिश्रण जोड़ें। प्रतिक्रिया रात भर चला।
  15. टीएलसी 16 और कैसर की परीक्षा के साथ प्रतिक्रिया के पूरा होने की पुष्टि (1.4 कदम देखो, एक पीले रंग की मुक्त राष्ट्रीय राजमार्ग 2 अभाव इंगित करता है) 17। प्रतिक्रिया पूरा हो गया है, तो के रूप में उत्पाद 1 (कदम 1.4-1.6) के लिए उल्लेख किया है, ईथर वर्षा के लिए आगे बढ़ना है, को अलग-थलग करने के लिए उत्पाद 7 (मेव-खूंटी 5K -Lys-लिस 2 - ((Fmoc) लिस - ((Fmoc) Cys (ठ्ठ))) 4।
  16. के रूप में कदम 1.8 में उल्लिखित, उत्पाद 8 प्राप्त करने के लिए, पर 7 Fmoc de-संरक्षण प्रदर्शन करना (- (लिस (एनएच 2) - खूंटी 5K -Lys-लिस 2 (Cys (एनएच 2) (ठ्ठ)))) 4। युगल (Fmoc) -PEG 2 -Suc-ओएच ( "Ebes" लिंकर, 24 equiv।) एक बहुलक प्रक्रिया HOBt के लिए ऊपर उल्लिखित का उपयोग कर मध्यवर्ती / डीआईसी की मध्यस्थता युग्मन पर मध्यवर्ती 9 (मेव-खूंटी 5K -Lys-लिस 2 -Lys 4 प्राप्त करने के लिए - (Cys (ठ्ठ) ) 4 (Ebes (एनएच Fmoc)) 8)।
  17. Fmoc de-संरक्षण का एक और दौर (कदम 1.6-1.8) मध्यवर्ती 10 प्राप्त करने के लिए प्रदर्शन (मेव-खूंटी 5K -Lys-लिस 2 -Lys 4 - (Cys (ठ्ठ)) 4 (Ebes (एनएच 2)) 8)।
  18. एक प्रतिक्रिया कुप्पी में बहुलक मध्यवर्ती 10 हस्तांतरण और इसे भंग करने के लिए निर्जल DMF (लगभग 30-40 मिलीलीटर) जोड़ें। एक और प्रतिक्रिया कुप्पी में, 24 equiv भंग। निर्जल DMF में CAOSu (पहले प्रकाशित प्रक्रिया के अनुसार तैयार) (20-30 मिलीलीटर), 18 की। 48 equiv जोड़ें। एन, एन -diisopropylethylamine की और इसे 10-15 मिनट के लिए हलचल करते हैं। प्रतिक्रिया 10 युक्त कुप्पी में सामग्री स्थानांतरण और प्रतिक्रिया रन ओ जानेvernight।
  19. टीएलसी 16 और कैसर की परीक्षा के साथ प्रतिक्रिया के पूरा होने की पुष्टि (1.4 कदम देखो, एक पीले रंग की मुक्त राष्ट्रीय राजमार्ग 2 अभाव इंगित करता है) 17। प्रतिक्रिया पूरा हो गया है, तो, आकाश वर्षा के लिए आगे बढ़ने के रूप में उत्पाद 1 (कदम 1.4-1.6) उत्पाद 11 को अलग-थलग करने के लिए (मेव-खूंटी 5K -Lys-लिस 2 -Lys 4 के लिए उल्लेख किया है - (Cys (ठ्ठ)) 4 -Ebes 8 -CA 8)। de-ionized पानी में Dialyze और नमूना lyophilize एक सफेद पाउडर उपज के लिए।
  20. बहुलक मध्यवर्ती 11 एक प्रतिक्रिया कुप्पी में रखें। तैयार है और बहुलक समाधान में टीएफए / 1,2-ethanedithiol (EDT) / triethylsilane (टीआईएस) के 20 मिलीग्राम / एच 2 ओ (94 / 2.5 / 1 / 2.5, वी / वी) मिश्रण जोड़ें। पूरा विघटन जब तक मिश्रण हिलाओ। 4 घंटे के लिए प्रतिक्रिया चलाएँ। टीएलसी 16 से प्रतिक्रिया के पूरा होने की पुष्टि करें।
  21. धूआं हुड के तहत, हवा में उड़ा बहुलक टीएफए / EDT / तीस / एच 2समाधान जब तक हे मिश्रण चिपचिपा हो जाता है। के रूप में उत्पाद 1 (कदम 1.4-1.6) के लिए उल्लेख किया है, ईथर वर्षा करने के लिए आगे बढ़ें, अंतिम उत्पाद, 12 (खूंटी 5K -Cys 4 -Ebes 8 -CA 8) को अलग-थलग करने के लिए। acetonitrile में इसे भंग करने और इसे lyophilize एक सफेद पाउडर उपज के लिए।

2. PTX से भरी हुई micelles की तैयारी

  1. एक PTX से भरी हुई खूंटी 5K -Cys 4 -Ebes 8 -CA 8 मिसेल मानक वाष्पीकरण पद्धति का उपयोग करके तैयार करें।
    1. एक अलग (CHCl 3) क्लोरोफॉर्म के 1 मिलीलीटर में PTX की राशि (1-9 मिलीग्राम) के साथ टीडी के 20 मिलीग्राम भंग। एक सजातीय, सूखी बहुलक फिल्म प्राप्त करने के लिए एक रोटरी बाष्पीकरण का उपयोग कर विलायक निकालें। 40 kHz पर 30 मिनट के लिए फॉस्फेट बफर खारा (पीबीएस) भंवर द्वारा की 1 मिलीलीटर के साथ फिल्म, sonication द्वारा पीछा किया Reconstitute, यदि आवश्यक हो, दवा भरी हुई micelles के गठन की अनुमति है।
    2. 3% की 6 μl जोड़ें (डब्ल्यू / डब्ल्यू) एच 2 ओ 2 (1 equiv। फादरthiol समूहों ईई) टीडी पर thiol समूहों oxidize के लिए। आगे लक्षण वर्णन के लिए मिसेल समाधान का प्रयोग एक बार मुक्त thiol समूहों के स्तर पर, के रूप में Ellman की परीक्षा 19 ने संकेत लगातार कम मूल्यों पर बनी हुई है।
    3. नमूना बाँझ 0.22 माइक्रोन फिल्टर के साथ समाधान फ़िल्टर। 9 बार acetonitrile जोड़ने और sonication के 10 मिनट के प्रदर्शन से micelles से दवाओं जारी करने के बाद एक एचपीएलसी 20 सिस्टम पर micelles में भरी हुई दवा की मात्रा का विश्लेषण। acetonitrile / मोबाइल चरण के रूप में पानी के साथ एचपीएलसी के लिए एक C18 स्तंभ का प्रयोग करें।
    4. एचपीएलसी क्षेत्र मूल्यों और दवा मानक 11 की सांद्रता के बीच अंशांकन वक्र के अनुसार दवा लोडिंग की गणना।
      ध्यान दें: लदान क्षमता दवा के अनुपात प्रारंभिक दवा सामग्री के लिए micelles में लोड के रूप में परिभाषित किया गया है।

3. micelles के अभिलक्षण

  1. मीटर के आकार और आकार के वितरण के उपायएक गतिशील प्रकाश बिखरने (DLS) साधन 29 के साथ icelles। कमरे के तापमान पर मापन प्रदर्शन और / एमएल 1 मिलीग्राम पर मिसेल एकाग्रता रखने के लिए।
    नोट: कण आकार विश्लेषण करते हैं, खाली के रूप में पीबीएस का उपयोग करें, और उसके बाद वास्तविक नमूने के लिए कण आकार रिकॉर्ड करने के लिए। नमूने के लिए तीन प्रतियों में रीडिंग लेने के लिए, और फिर रीडिंग औसत।
  2. प्रतिदीप्ति स्पेक्ट्रा का प्रयोग के रूप में पहले 13,21 वर्णित है, पहले और एक हाइड्रोफोबिक फ्लोरोसेंट जांच के रूप में pyrene के साथ पार से जोड़ने के बाद खूंटी 5K -Cys 4 -Ebes 8 -CA 8 के महत्वपूर्ण micellar एकाग्रता (सीएमसी) को मापने के लिए।
    नोट: आमतौर पर, मिसेल एकाग्रता 5 × 10 -7 से 5 × 10 -4 एम पर्वतमाला

4. के साथ या एजेंटों को कम करने के बिना एसडीएस में micelles की स्थिरता

  1. सोडियम सल्फेट dodecyl के शेयर समाधान (एसडीएस) समाधान (7.5 मिलीग्राम / एमएल) और पीबीएस में डाइसल्फ़ाइड पार से जुड़े micelles (1.5 मिलीग्राम / एमएल) तैयार करें। अगले, यूस्टॉक समाधान गाते हैं, एक समाधान मिश्रण है जिसमें अंतिम एसडीएस एकाग्रता में है 2.5 मिलीग्राम / एमएल और मिसेल एकाग्रता 1.0 मिलीग्राम / एमएल पर है।
  2. आकार और आकार के वितरण के उपाय के साथ या 10 मिमी glutathione (GSH) की उपस्थिति के बिना पूर्व निर्धारित समय अंतराल पर मिसेल समाधान के रूप में (3.1 कदम में उल्लेख किया है)।

5. hemolysis परख

  1. पहले प्रकाशित प्रक्रिया 11 और PTX से भरी हुई पार से जुड़े micelles (PTX-DCMS) नग्न चूहों से ताजा citrated रक्त का उपयोग करने से एकत्र के अनुसार तैयार PTX से भरी हुई, गैर पार से जुड़े micelles (PTX-NCMs) के रक्तलायी क्षमता का मूल्यांकन पूंछ घूंघट।
    1. 10 मिनट के लिए 1,000 XG पर खून का नमूना (1.0 एमएल) की centrifugation द्वारा लाल रक्त कोशिकाओं को इकट्ठा उन्हें पीबीएस के साथ तीन बार धोने, और फिर 2% की एक अंतिम एकाग्रता के लिए पीबीएस के साथ सेल छर्रों फिर से निलंबित।
  2. विभिन्न सांद्रता (0.2 और 1.0 के साथ एरिथ्रोसाइट निलंबन के 200 μl मिक्समिलीग्राम PTX-NCMs और PTX-DCMS, का / एमएल) क्रमशः, और 4 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर एक मशीन प्रकार के बरतन में सेते हैं।
  3. 5 मिनट के लिए 3,000 XG पर मिसेल-एरिथ्रोसाइट मिश्रण अपकेंद्रित्र। एक 96 अच्छी तरह से थाली करने के लिए सभी नमूनों की सतह पर तैरनेवाला के 100 μl स्थानांतरण। 540 एनएम पर सतह पर तैरनेवाला में मुक्त हीमोग्लोबिन की absorbance के उपाय एक माइक्रो-प्लेट रीडर का उपयोग।
    नोट: लाल रक्त कोशिकाओं ट्राइटन 100 (2%) और पीबीएस के साथ incubated सकारात्मक और नकारात्मक नियंत्रण के रूप में इस्तेमाल किया जाएगा, क्रमशः रहे हैं। लाल रक्त कोशिकाओं का प्रतिशत hemolysis निम्न सूत्र के साथ गणना की है: आरबीसी hemolysis = (आयुध डिपो नमूना - आयुध डिपो नकारात्मक नियंत्रण) / (आयुध डिपो सकारात्मक नियंत्रण - आयुध डिपो नकारात्मक नियंत्रण) × 100%।

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Representative Results

तैयारी और दवा भरी हुई, डाइसल्फ़ाइड क्रॉस से जुड़े micelles की विशेषता

Amphiphilic बहुलक खूंटी 5K -Cys 4 -Ebes 8 -CA 8 एक वृक्ष के समान कैंसर दवा वितरण के लिए एक डाइसल्फ़ाइड पार से जुड़े micellar प्रणाली बनाने में सक्षम बहुलक है। संरचनात्मक रूप से, यह cholic एसिड (हाइड्रोफोबिक डोमेन) एक branched पाली (लाइसिन सिस्टीन-Ebes) रीढ़ की हड्डी के माध्यम से रेखीय खूंटी अणु (हाइड्रोफिलिक डोमेन, आणविक वजन 5K) के एक छोर से जुड़े एक वृक्ष के समान oligomer के रूप में परिभाषित किया गया है। वहाँ अन्य सूचना micellar सिस्टम पर इन copolymers ब्लॉक उपयोग करने के कई फायदे हैं। सबसे पहले, यह आसानी से चरणबद्ध समाधान चरण संक्षेपण प्रतिक्रियाओं के माध्यम से संश्लेषित किया जा सकता है। दूसरा, कई अन्य सूचना amphiphilic पॉलिमर, Thiolated बहुलक प्रणाली, अच्छी तरह से स्थापित समाधान चरण चरणबद्ध Fmoc पेप्टाइड रसायन विज्ञान के माध्यम से तैयार की तुलना में, एक अच्छी तरह से परिभाषित संरचना हैफिर से। यह lyophilized पाउडर के रूप में संग्रहित किया जा सकता है और एक विस्तारित शैल्फ जीवन है।

कई तकनीकों अंत उत्पाद को चिह्नित करने के लिए उपयोग किया जा सकता है। टीडी से जुड़ी cholic एसिड की मात्रा 1 एच एनएमआर स्पेक्ट्रा में cholic एसिड के तीन मिथाइल समूहों पर उन लोगों के लिए खूंटी पर प्रोटॉन की संकेत अनुपात की तुलना से पता लगाया जा सकता है। टीडी की आणविक वजन MALDI-TOF मास स्पेक्ट्रोमेट्री और जेल पारगमन क्रोमैटोग्राफी (जीपीसी) द्वारा की पुष्टि की जा सकती है। मात्रात्मक Ellman का परीक्षण अणु प्रति वर्तमान मुक्त सिस्टीन अवशेषों की संख्या समझने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है।

खूंटी 5K -Cys 4 -Ebes 8 -CA 8 जलीय मीडिया में micelles फार्म के लिए स्वयं को इकट्ठा कर सकते हैं। एक मानक विलायक वाष्पीकरण विधि, ऐसे PTX और vincristine के रूप में हाइड्रोफोबिक दवाओं की एक किस्म का उपयोग करना, सफलतापूर्वक micelles 13,22 में समझाया गया है। oxygएन पहले खूंटी 5K -Cys 4 -Ebes 8 -CA 8 से मुक्त thiol समूहों oxidize के लिए और इंट्रा-micellar डाइसल्फ़ाइड पार लिंकेज के लिए फार्म का उपयोग किया गया था। Ellman का परीक्षण द्वारा निगरानी के रूप में, मुक्त thiol समूहों से रूपांतरण दर बांड डाइसल्फ़ाइड को ऑक्सीकरण के 48 घंटे के बाद 85% पर पहुंच गया। एएच 2 ओ 2 मध्यस्थता oxidization हाल ही में एक वैकल्पिक तरीके के रूप में कार्यरत था। रूपांतरण दर 30 मिनट (चित्रा 2) है, जो 96 बार पिछले दृष्टिकोण से भी तेज था में 88% पर पहुंच गया। के PTX से भरी हुई पचास ग्राम, डाइसल्फ़ाइड पार से जुड़े नैनोकणों सफलतापूर्वक इस और अधिक कुशल दृष्टिकोण (चित्रा 3) का उपयोग कर उत्पादन किया गया है। कण आकार लगभग 27 समुद्री मील दूर था, एक संकीर्ण आकार के वितरण (चित्रा 3) के साथ। दवा लदान क्षमता 4.0 मिलीग्राम / एमएल के PTX लोडिंग के साथ 100% का दरवाजा खटखटाया। डाइसल्फ़ाइड पार से जोड़ने सीएमसी मूल्य पर एक नाटकीय प्रभाव नहीं पड़ा। मानक टीडी खूंटी 5K -CA 8 कि कमी की तुलनाडाइसल्फ़ाइड बांड, पार से जुड़े टीडी मनाया सीएमसी मूल्यों में 10 गुना कमी (बनाम 0.67 सुक्ष्ममापी 5.53 माइक्रोन) के 13 दिखाया।

स्थिरता अध्ययन

हम आगे गंभीर मिसेल में खलल न डालें शर्तों के खिलाफ PTX से भरी हुई है, डाइसल्फ़ाइड पार से जुड़े micelles की स्थिरता की जांच की। सोडियम dodecyl सल्फेट (एसडीएस) एक मजबूत ईओण डिटर्जेंट कि नियमित तौर पर, micellar स्थिरता का आकलन करने के लिए प्रयोग किया जाता है के रूप में यह कुशलता बहुलक micelles टूट सकता है। दवा भरी हुई, डाइसल्फ़ाइड पार से जुड़े micelles (1.0 मिलीग्राम / एमएल) की स्थिरता मिसेल में खलल न डालें एसडीएस (2.5 मिलीग्राम / एमएल) की उपस्थिति में डीएलएस द्वारा नजर रखी थी। Micelles के कण आकार के समय के साथ स्थिर बने रहे, यह दर्शाता है कि इस तरह के पार से जुड़े micelles बरकरार रह (चित्रा 4, बाएं पैनल)। Reductive की स्थिति, हाइड्रोफोबिक कोर में डाइसल्फ़ाइड बांड फोड़ना करने के लिए उम्मीद कर रहे हैं वहाँEby अस्थिरता के लिए अतिसंवेदनशील micelles कर रही है। Glutathione (GSH), एक अंतर्जात एजेंट को कम करने, अक्सर इस तरह के अध्ययन के लिए कार्यरत है। वहाँ बाह्य स्तर (बनाम 2 माइक्रोन 10 मिमी) की तुलना में GSH के intracellular स्तर में विपरीत है। सांद्रता में यह अंतर अक्सर उत्तेजनाओं उत्तरदायी सिस्टम उत्पन्न करने के लिए प्रयोग किया जाता है। एक intracellular एकाग्रता (10 मिमी), 23 पर GSH के अलावा के बाद, दवा भरी हुई है, डाइसल्फ़ाइड पार से जुड़े micelles का आकार 30 मिनट के लिए बरकरार रह गए। वे अचानक 1 एनएम की कमी हुई, डाइसल्फ़ाइड बांड, micelles (चित्रा 4, सही पैनल) के तेजी से हदबंदी की एक शर्त के एक महत्वपूर्ण संख्या की कमी वाचक। इसके विपरीत, प्रणाली GSH के बाह्य सांद्रता की उपस्थिति में स्थिर बने रहे (नहीं दिखाया डेटा)।

hemolysis अध्ययन

आकृति5 PTX से भरी हुई micelles के साथ या डाइसल्फ़ाइड पार से जोड़ने के बिना मनाया रक्तलायी गतिविधि में मतभेद से पता चलता है। रक्त कोशिकाओं के hemolysis जब रक्त प्रवाह में इन कणों के प्रशासन से परहेज किया जाना चाहिए, के रूप में यह उनकी चिकित्सीय लाभ को नजरअंदाज। Hemato-अनुकूलता ऐसे amphiphilic टीडीएस संभावित लिपिड solubilize करने के लिए या खुद को फॉस्फोलिपिड झिल्ली में डालने के लिए, प्लाज्मा झिल्ली की rupturing के लिए अग्रणी है कि के रूप में बहुलक आधारित दवा वाहक, के vivo आवेदन के लिए बहुत महत्वपूर्ण है। जैसा कि चित्र में दिखाया गया है 5, PTX-NCMs एक खुराक पर निर्भर लाल रक्त कोशिका (आरबीसी) सेल गिनती, hemolysis का प्रतिशत PTX-NCMs की एकाग्रता के रूप में 14.2% से 8.1% से बढ़ रही है 0.2 मिलीग्राम से बढ़ाकर साथ है पाए गए / 1.0 मिलीग्राम / मिलीलीटर मिलीलीटर। हालांकि, PTX-DCMS है कि डाइसल्फ़ाइड पार से जोड़ने के लिए एक ही प्रयोगात्मक परिस्थितियों में लाल रक्त कोशिकाओं में कोई प्रत्यक्ष रक्तलायी गतिविधियों (<1.0%) से पता चला। hemolys में यह अंतरप्रवृत्ति इंट्रा-micellar डाइसल्फ़ाइड हाइड्रोफोबिक मूल में उपस्थित पुलों, जो amphiphilic टीडीएस फार्म के लिए अलग से PTX-DCMS को रोकने के लिए जिम्मेदार ठहराया जा सकता है।

आकृति 1
चित्रा 1: पार से जुड़े micelles के गठन के लिए कदम। डाइसल्फ़ाइड पार से जुड़े स्वयं विधानसभा के बाद Thiolated telodendrimer खूंटी 5K -Cys 4 -Ebes 8 -CA 8 की oxidization द्वारा गठित micelles की योजनाबद्ध प्रतिनिधित्व। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र 2
चित्रा 2: पार से जुड़े मिसेल गठन के लिए ऑक्सीकरण तरीकों। टी के रूपांतरण दरवह टीडीएस पर समूहों दो ऑक्सीकरण तरीकों के लिए ऑक्सीकरण समय के एक समारोह के रूप में बांड डाइसल्फ़ाइड को thiol। micelles की कुल एकाग्रता 20 मिलीग्राम / एमएल पर रखा गया था। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र तीन
चित्रा 3: दवा भरी हुई, पार से जुड़े मिसेल। वाम पैनल: PTX से भरी हुई है, डाइसल्फ़ाइड पार से जुड़े micelles के एक बैच की एक तस्वीर। स्केल पट्टी: 1 इंच। सही पैनल: कण आकार, के रूप में गतिशील प्रकाश बिखरने (DLS) द्वारा निर्धारित की। micelles की कुल एकाग्रता 20 मिलीग्राम / एमएल पर रखा गया था। PTX की लोडिंग 4 मिलीग्राम था / एमएल। कण आकार डेटा ± एसडी औसत कण आकार तीन माप के आधार के रूप में दिखाया गया था। एसडी: मानक विचलन, मापा कण आकार के वितरण की चौड़ाई का वर्णन है।यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 4
चित्रा 4: स्थिरता अध्ययन। कण के बिना (बाएं) या के साथ (दाएं) GSH (10 मिमी) 2.5 मिलीग्राम / एमएल एसडीएस की उपस्थिति में PTX से भरी हुई है, डाइसल्फ़ाइड पार से जुड़े micelles के आकार, के रूप में डीएलएस द्वारा मापा जाता है। कण आकार डेटा ± एसडी औसत कण आकार तीन माप के आधार के रूप में दिखाया गया था। एसडी: मानक विचलन, मापा कण आकार के वितरण की चौड़ाई का वर्णन है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 5
चित्रा 5: hemolysis परख। इन विट्रो रक्तलायी PTX से भरी हुई है, डाइसल्फ़ाइड पार से जुड़े micelles की तुलना में गैर crosslinked micelles के लिए लाल रक्त कोशिकाओं पर गतिविधियों (लाल रक्त कोशिकाओं)। ट्राइटन 100 (2%) और पीबीएस क्रमश: सकारात्मक और नकारात्मक नियंत्रण के रूप में इस्तेमाल किया गया। सूचना मूल्यों मतलब ± तीन प्रतियों के नमूने के एसडी हैं। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

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Discussion

कई नैनोकणों दवा वितरण में अपनी क्षमता का उपयोग करने के लिए जांच की गई है। लिपोसोमल डॉक्सोरूबिसिन और Paclitaxel (PTX) -loaded मानव सीरम albumin नैनो-समुच्चय nanotherapeutics कैंसर के इलाज के लिए एफडीए द्वारा अनुमोदित शामिल हैं। हालांकि, हालांकि चिकित्सकीय प्रभावी, इन nanotherapeutics के दोनों अपेक्षाकृत "बड़े" आकार में हैं, और वे जिगर और फेफड़ों में जमा करते हैं। अपेक्षाकृत छोटे कण आकार और उच्च दवा लोडिंग क्षमता के साथ Polymeric micelles दवा वितरण के लिए nanocarriers उभर रहे हैं। उनके अद्वितीय कोर-खोल संरचना '' solubilize '' शारीरिक encapsulation से जलीय की शर्तों के तहत हाइड्रोफोबिक दवा अणुओं। Polymeric एक लंबी शैल्फ जीवन और दवाओं encapsulating में उच्च दक्षता के साथ हमारी प्रयोगशाला प्रपत्र monodispersed नैनोकणों में तैयार अच्छी तरह से परिभाषित टीडीएस (10-50 एनएम कण आकार) से बना micelles। मजबूत टीडी मंच के कई लाभ में से एक बहुलक का बहुमुखी प्रतिभा है।कई दवाएं, फ्लोरोसेंट रंजक, और लक्षित कर ligands आसानी टीडी मंच 13,15,24 में शामिल किया जा सकता है।

प्रोटोकॉल के भीतर महत्वपूर्ण कदम

हम एक मजबूत, प्रतिवर्ती, डाइसल्फ़ाइड पार से जुड़े मिसेल PTX वितरण, जो अच्छी तरह से परिभाषित किया गया है, 27 एनएम के चारों ओर एक कण आकार के साथ के लिए प्रणाली विकसित की है, और एक संकीर्ण आकार वितरण किया गया है। टीडीएस चरणबद्ध समाधान चरण पेप्टाइड रसायन विज्ञान के माध्यम से संश्लेषित कर रहे थे। इन टीडीएस की अच्छी तरह से परिभाषित रासायनिक संरचना वांछित गुणों के साथ नैनोकणों पैदा करने के लिए महत्वपूर्ण कारक है। इसलिए, टीएलसी और कैसर की परीक्षा के साथ प्रतिक्रिया के पूरा होने की पुष्टि के लिए बहुत महत्वपूर्ण है। एच 2 ओ 2 oxidization भी एक महत्वपूर्ण कदम है, टीडी पर thiol समूहों डाइसल्फ़ाइड पार संबंध बनाने के लिए है, जो बहुत micelles की स्थिरता को बढ़ाने ऑक्सीकरण हो जाता है। हमारे पिछले ऑक्सीजन आधारित ऑक्सीकरण विधि की तुलना में, एच 2 ओ 2 -आधारित oxidization विधि इस प्रकार कम समय अवधि में पार से जुड़े micelles उपलब्ध कराने, 96 गुना तेज है। इसके अलावा, GSH, एक thiol युक्त tripeptide, एक महत्वपूर्ण एंटी ऑक्सीडेंट कोशिकाओं द्वारा निर्मित है, और यह मुक्त कण और प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन यौगिकों सफाई करने में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। यह सेलुलर redox homeostasis बनाए रखने के द्वारा प्रमुख योगदान करता है। GSH के सेलुलर एकाग्रता दवा डिजाइन का एक दिलचस्प पहलू है। GSH के intracellular एकाग्रता अब मजबूती से बाह्य एकाग्रता (10 मिमी 2 माइक्रोन क्रमश: बनाम), 25 की तुलना में काफी अधिक होने की स्थापना की है। इससे भी महत्वपूर्ण बात, एक ऊंचा intracellular GSH स्तर अक्सर कई दवा प्रतिरोधी मानव और murine ट्यूमर कोशिकाओं 26 में सूचना दी गई है। GSH के उच्च intracellular वितरण micelles और रिहाई और नशीली दवाओं के पेलोड के संचय में परिणामों की डाइसल्फ़ाइड पार से जोड़ने का टूटना की सुविधा। डाइसल्फ़ाइड पार से जुड़े हैं नैनोकणोंएसडीएस की उपस्थिति में स्थिर। हालांकि, एक GSH-अमीर intracellular पर्यावरण डाइसल्फ़ाइड बांड टूट, जिससे सिस्टम को अस्थिर द्वारा दवा की रिहाई हो सके। पॉलिमर प्रेरित hemolysis जैसे लाल रक्त कोशिकाओं के रूप में रक्त घटक, साथ बहुलक micelles के हानिकारक बातचीत से हुई। क्रॉस से जुड़े micelles गैर-पार से जुड़े analogues की तुलना में बहुत कम hemolysis दिखाया।

संशोधन और समस्या निवारण

एक ऑक्सीकरण एजेंट के रूप में एच 2 ओ 2 का उपयोग एक अधिक कुशल डाइसल्फ़ाइड पार से लिंक गठन के लिए जब कि पहले बताया, ऑक्सीजन आधारित पद्धति 13 की तुलना में अनुमति देता है। एच 2 ओ 2 एक मजबूत ऑक्सीकरण एजेंट 27 कि सस्ती और अत्यधिक पानी में घुलनशील है और कुछ अन्य ज्ञात ऑक्सीकरण एजेंट (जैसे, क्रोमेट या परमैंगनेट) की तुलना में उच्च गुणवत्ता वाले उत्पादों देता है। हालांकि, oxidization समय furthe होना पड़ सकता हैआर संश्लेषण के पैमाने के आधार पर अनुकूलित।

तकनीक की सीमाएं

एच 2 ओ 2 एक मजबूत आक्सीकारक है। हालांकि एच 2 ओ 2 के एक कम एकाग्रता डाइसल्फ़ाइड पार से लिंक गठन से बाहर ले जाने के लिए प्रयोग किया जाता है, देखभाल जब "ऑक्सीकरण के प्रति संवेदनशील" अवांछनीय दवा गिरावट को रोकने के लिए दवाओं के साथ भरी हुई टीडीएस के साथ प्रयोग कर लिया जाना है।

मौजूदा / वैकल्पिक तरीके के लिए सम्मान के साथ तकनीक का महत्व

तकनीक का वर्णन एक आसान प्रयोगात्मक सेटअप है कि आसानी से एक मानक प्रयोगशाला में दोहराया जा सकता है। उदाहरण के लिए, दवा एक मानक वाष्पीकरण विधि का उपयोग लोडिंग कम समय डायलिसिस विधि की तुलना में लेने वाली है। कोर में डाइसल्फ़ाइड गठन ऑक्सीकरण एजेंट के रूप में एच 2 ओ 2 का उपयोग कर 96 गुना तेजी से पहले की रिपोर्ट oxidization oxyg का उपयोग कर विधि की तुलना में हैएन 13। दवा लोडिंग कदम के reproducibility आसानी से कण आकार (डीएलएस विधि) और दवा सामग्री (एचपीएलसी) को मापने के द्वारा मूल्यांकन किया जा सकता है।

भविष्य के अनुप्रयोगों या दिशा-निर्देश के बाद इस तकनीक में माहिर

छोटे अणु दवाओं की तुलना में, प्रमुख बाधाओं की जरूरत है कि एक से पहले नैनो दवा को दूर करने की मुख्यधारा कैंसर देखभाल सेटिंग्स उत्पादन 28 स्केलिंग की तकनीकी चुनौतियों है डाल सकते हैं। इस नव विकसित तकनीक के माहिर के बाद, एक बड़ी आसानी से एक बड़े पैमाने पर डाइसल्फ़ाइड पार से जुड़े micelles संश्लेषण कर सकते हैं। यह मानव रोगियों में इस नैनो तैयार करने के नैदानिक ​​अध्ययन के लिए अत्यंत आवश्यक है।

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Materials

Name Company Catalog Number Comments
MeO-PEG5K-NH2 Rapp Polymere 125000-2
Fmoc-Lys(Fmoc)-OH Aaptec AFK107
Fmoc-Lys(Boc)-OH Anaspec AS-20132
Fmoc-Cys(Trt)-OH Aapptec AAC105
Dimethylformamide Fisher Scientific BP1160-4
Ethyl ether Fisher Scientific E134-20
N,N-Diisopropylethylamine Sigma Aldrich D125806
Trifluoroacetic acid Sigma Aldrich T6508 Corrosive, handle with care
4-methyl piperidine Alfa-Aesar L-02709
Ebes linker Anaspec AS-61924
Cholic acid Sigma Aldrich C1129
1,2-Ethanedithiol Sigma Aldrich 02390 Handle inside fume hood. Bleach gloves after usage.
Triisopropylsilane Sigma Aldrich 233781
Chloroform (anhydrous) Sigma Aldrich 288306
Hydrogen peroxide solution 30% Aaron Industries NA
HoBt-Cl Aaptec CXZ096
DIC Sigma Aldrich D125407
Female athymic nude mice (Nu/Nu strain), 6–8 weeks age Harlan (Livermore, CA)

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References

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जैव रसायन अंक 118 nanoparticle दवा वितरण micelles telodendrimer डाइसल्फ़ाइड पार से जोड़ने हाइड्रोजन पेरोक्साइड की मध्यस्थता ऑक्सीकरण
प्रतिवर्ती Disulfide क्रॉस से जुड़े micelles के उत्पादन के लिए एक सतही और कुशल दृष्टिकोण
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Li, Y., Bharadwaj, G., Lee, J. S. A… More

Li, Y., Bharadwaj, G., Lee, J. S. A Facile and Efficient Approach for the Production of Reversible Disulfide Cross-linked Micelles. J. Vis. Exp. (118), e54722, doi:10.3791/54722 (2016).

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