Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- כדי להקים את כלוב איסוף העוברים, השתמשו בצלחות אגר מיץ ענבים בתוספת משחת שמרים טרייה והניחו את הצלחות על כלובים המכילים זבובי דרוזופילה זכר ונקבה של הגנוטיפ המתאים. הריח מהשמרים ומיץ הענבים הוא אטרקטיבי ומקדם הטלת ביצים על ידי הנקבות. הצלחת נחתכה ומלאה במשחת שמרים.
זחלים צעירים חייבים להאכיל כדי לעלות במשקל הגוף כדי לפתח, אז הם מתחפרים במקור המזון, משחת השמרים. ככל שהם מתפתחים, הזחלים נכנסים לשלב נדודים ומנהרה הרחק מהמזון כדי לחפש אתר לגור. כדי להעריך היפוקסיה, לבחון את דפוסי המנהור בצורת זחלים במצע. חוסר או מנהור לא מספיק הוא סימן של מחסור בחמצן. בפרוטוקול לדוגמה, נראה כיצד להגדיר את מחפירה ומנהרה assay.
- הגדר את הבקרה ואת הצלבים הגנטיים הניסיוניים במנות מטילות ביצה כמתואר בפרוטוקול הטקסט. שמור את הזבובים בחושך לפחות יומיים לפני תחילת אוספי הביצים המתוזמנות. לקבלת איסוף ביצים מתוזמן, העבר את המבוגרים לצלחות אגר ענבים חדשות המעוטרות במריחה טרייה של משחת שמרים מוקדם ביום ואפשר למבוגרים להטיל ביצים על הצלחות במשך ארבע שעות.
לאחר מכן, דגירה צלחות איסוף של ארבע שעות לילה ב 25 מעלות צלזיוס.
לריצה אחת של ההסמכה, הכינו לפחות חמש צלחות לבדיקה לכל קבוצה ניסיונית. מחממים את תמיסת הגר עד שהיא מומסת כמעט לחלוטין.
אגר נרפא חייב להיות מוצק למגע ולהתנגד מתפורר כאשר חתיכות נחתכים ממנו.
כדי להעביר את הזחלים לצלחת ההסמכה, הכינו כלי פשוט.
כדי להבטיח שחזור בין משכפלים assay, זה קריטי כי רק 10 זחלים ממוקמים על כל צלחת הבדיקה.
ברגע שהצלחת נטענת, תייג אותה, כסה אותה, ואז מניחים אותו בחושך עם צד המכסה למעלה בטמפרטורת החדר.
בזהירות להעביר את הגומה עם מחט מתגרה כפוף לצלחת ענבים ואם תרצה, לספור כמה eclose גולם.
