Montage des cerveaux de drosophile adulte : une méthode pour préparer des diapositives pour l’imagerie confocale

- Sur une lame de microscope chargée positivement, adhérez à deux glissements de couverture avec suffisamment de distance entre eux pour créer un espace pour que les cerveaux de Drosophila soient montés. Sous le microscope stéréo, pipette les cerveaux dans le milieu de montage dans cet espace. La charge négative du tissu aidera les cerveaux à adhérer à la charge positive sur la surface de la glissière.

Enlevez le milieu de montage excédentaire pour permettre le positionnement précis des cerveaux sur la glissière dans un modèle de grille avec les lobes d’antenne faisant face vers le haut, puis faites le pont les deux glissements de couverture en adhérant à un troisième glissement de couverture à travers pour couvrir les cerveaux.

Pour remplir la cavité, placez le milieu de montage une goutte à la fois dans le bord de la cavité, et laissez-la se propager par le mouvement capillaire de sorte qu’il ne perturbe pas le cerveau.

Sceller la cavité avec du vernis à ongles, et stocker à 20 degrés Celsius négatif dans l’obscurité pour préserver la fluorescence des tissus tachés.

Dans le protocole d’exemple, nous monterons des cerveaux de Drosophila pour l’imagerie confocale des neurones immunotachés.

- Pour monter le cerveau, construire une glissade de pont. La position deux couvertures de base glisse à environ un centimètre l’une de l’autre sur une glissière chargée positivement. Assurez-vous que le côté chargé positivement est face vers le haut. Puis adhérez aux glissements de couverture à la glissière avec du vernis à ongles, et laissez le vernis sécher complètement avant de procéder.

Ensuite, placez la diapositive sous un microscope stéréo et pipette cerveaux en milieu dans l’espace entre les glissements de couverture. Assurez-vous d’ajuster l’éclairage pour améliorer la visualisation du cerveau.

Ensuite, aspirez les supports de montage supplémentaires de la lame, en prenant soin d’éviter les cerveaux. Puis, évacuez les supports de montage excédentaires restants. Cela permettra aux cerveaux d’être positionnés plus précisément. Maintenant, à l’aide de forceps, orientez les cerveaux dans un modèle de grille avec leurs lobes d’antenne face vers le haut.

Ensuite, placez un glissement de couverture sur le cerveau, et utilisez du vernis à ongles pour sceller les bords de la feuille de couverture supérieure qui sont attachés aux feuillets de couverture de base.

Maintenant, chargez la cavité centrale avec le support frais de montage drop-wise, permettant au média d’être dessiné sous le glissement de couverture par l’action capillaire. Quand la cavité est remplie, scellez-la complètement en utilisant le vernis clair d’ongle.