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Une étape de purification de protéines Twin-Strep-marqués et leurs complexes sur Strep-Tactin résine réticulée Avec Bis (sulfosuccinimidyl) subérate (BS3)
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Biology
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JoVE Journal Biology
One-step Purification of Twin-Strep-tagged Proteins and Their Complexes on Strep-Tactin Resin Cross-linked With Bis(sulfosuccinimidyl) Suberate (BS3)
DOI:

18:27 min

April 20, 2014

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Chapters

  • 00:05Title
  • 00:11Introduction
  • 01:32Overview
  • 01:37Competitive Elution with Biotin
  • 02:44Denaturing Elution with SDS
  • 03:26Chemical Cross-linking of the Resin
  • 04:10Protocol
  • 04:13Cross-linking of the Resin with BS3
  • 07:22Quenching of the Cross-linking Reaction
  • 09:50Binding of the Bait Protein and Associated Complexes to the Resin
  • 12:18Washing of the Resin
  • 14:23Elution of Specific Protein Complexes
  • 15:32Representative Results
  • 17:18Conclusion

Summary

Automatic Translation

Une méthode est décrite pour la purification efficace de protéines de fusion bi-Strep-marqués et leurs complexes spécifiques sur streptavidine modifiée (Strep-Tactin) résine réticulé de manière covalente avec Bis (sulfosuccinimidyl) subérate (BS3). Le procédé présente les avantages d'une vitesse rapide, une bonne récupération de la protéine cible et de haute pureté, et est compatible avec une analyse ultérieure par spectrométrie de masse.

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