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De un solo paso de purificación de proteínas etiquetadas-Twin-Strep y sus complejos de Strep-Tactin resina reticulado con Bis (sulfosuccinimidil) suberato (BS3)
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One-step Purification of Twin-Strep-tagged Proteins and Their Complexes on Strep-Tactin Resin Cross-linked With Bis(sulfosuccinimidyl) Suberate (BS3)
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De un solo paso de purificación de proteínas etiquetadas-Twin-Strep y sus complejos de Strep-Tactin resina reticulado con Bis (sulfosuccinimidil) suberato (BS3)

DOI:
10.3791/51536-v

•

18:27 min

•

April 20, 2014

•

, , ,
1Department of Food and Environmental Sciences,University of Helsinki, 2Institute of Biotechnology,University of Helsinki

Chapters

  • 00:05Title
  • 00:11Introduction
  • 01:32Overview
  • 01:37Competitive Elution with Biotin
  • 02:44Denaturing Elution with SDS
  • 03:26Chemical Cross-linking of the Resin
  • 04:10Protocol
  • 04:13Cross-linking of the Resin with BS3
  • 07:22Quenching of the Cross-linking Reaction
  • 09:50Binding of the Bait Protein and Associated Complexes to the Resin
  • 12:18Washing of the Resin
  • 14:23Elution of Specific Protein Complexes
  • 15:32Representative Results
  • 17:18Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Se describe un método para la purificación eficiente de proteínas de fusión doble-Strep-etiquetados y sus complejos específicos sobre estreptavidina modificada (Strep-Tactin) de resina covalentemente reticulado con bis (sulfosuccinimidil) suberato (BS3). El método tiene las ventajas de velocidad rápida, buena recuperación proteína diana y alta pureza, y es compatible con el análisis posterior por espectrometría de masas.

Tags

Keywords: Twin-Strep-tagSIII-tagStrep-TactinAffinity PurificationBis(sulfosuccinimidyl) Suberate (BS3)Cross-linkingSDS ElutionProtein ComplexesMass SpectrometryVPg-ProN. Benthamiana

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