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Ein-Schritt-Reinigung von Twin-Strep-markierten Proteine ​​und ihre Komplexe auf Mit Bis (Sulfosuccinimidyl) Strep-Tactin Resin Vernetzte suberat (BS3)
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One-step Purification of Twin-Strep-tagged Proteins and Their Complexes on Strep-Tactin Resin Cross-linked With Bis(sulfosuccinimidyl) Suberate (BS3)
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Ein-Schritt-Reinigung von Twin-Strep-markierten Proteine ​​und ihre Komplexe auf Mit Bis (Sulfosuccinimidyl) Strep-Tactin Resin Vernetzte suberat (BS3)

DOI:
10.3791/51536-v

•

18:27 min

•

April 20, 2014

•

, , ,
1Department of Food and Environmental Sciences,University of Helsinki, 2Institute of Biotechnology,University of Helsinki

Chapters

  • 00:05Title
  • 00:11Introduction
  • 01:32Overview
  • 01:37Competitive Elution with Biotin
  • 02:44Denaturing Elution with SDS
  • 03:26Chemical Cross-linking of the Resin
  • 04:10Protocol
  • 04:13Cross-linking of the Resin with BS3
  • 07:22Quenching of the Cross-linking Reaction
  • 09:50Binding of the Bait Protein and Associated Complexes to the Resin
  • 12:18Washing of the Resin
  • 14:23Elution of Specific Protein Complexes
  • 15:32Representative Results
  • 17:18Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Es wird ein Verfahren zur effizienten Reinigung von Doppel Strep-tag-Fusionsproteine ​​und deren Komplexe spezifisch auf modifizierte Streptavidin beschrieben (Strep-Tactin)-Harz kovalent mit Bis (sulfosuccinimidyl) suberat (BS3) vernetzt. Das Verfahren hat die Vorteile der schnellen Geschwindigkeit, gute Zielprotein Recovery und hohe Reinheit und ist mit nachfolgender Analyse durch Massenspektrometrie kompatibel.

Tags

Keywords: Twin-Strep-tagSIII-tagStrep-TactinAffinity PurificationBis(sulfosuccinimidyl) Suberate (BS3)Cross-linkingSDS ElutionProtein ComplexesMass SpectrometryVPg-ProN. Benthamiana

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