Görselleştirme Thalamocortical Axon dallanma ve sinaps oluşumunda Organotypic Cocultures

Neuroscience

Your institution must subscribe to JoVE's Neuroscience section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Bu iletişim kuralı thalamocortical akson dallanma ve synapse oluşumu organotypic cocultures, talamus ve serebral korteks eşzamanlı görüntüleme için bir yöntemi açıklar. Bireysel thalamocortical akson ve presynaptic onların terminalleri bir tek hücre çoğalmasıyla tekniği ile DsRed ve synaptophysin GFP öğesini tarafından görüntülenmiştir.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

Matsumoto, N., Yamamoto, N. Visualization of Thalamocortical Axon Branching and Synapse Formation in Organotypic Cocultures. J. Vis. Exp. (133), e56553, doi:10.3791/56553 (2018).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Axon dallanma ve synapse oluşumu kesin nöronal devreler kurmak için çok önemli işlemler vardır. Geliştirme sırasında duyusal thalamocortical (TC) aksonlar serebral korteksin belirli katmanlar halinde şube ve sinapslarda oluştururlar. Axon dallanma ve synapse oluşumu arasında bariz uzamsal ilişki rağmen aralarındaki nedensel ilişki kötü anlaşılmaktadır. Bu sorunu gidermek için son zamanlarda bireysel TC aksonlar organotypic cocultures içinde dallanma ve synapse oluşumu aynı anda görüntüleme için bir yöntem geliştirdi.

Bu iletişim kuralı bir organotypic coculture ve elektroporasyon birleşimini içerir bir yöntemini açıklar. Organotypic cocultures, talamus ve serebral korteks gen manipülasyon ve gözlem Laminer yapılandırması gibi karakteristik yapıları koruyarak aksonal süreçlerin kolaylaştırmak. DsRed ve EGFP etiketli synaptophysin (SYP-EGFP) kodlama iki ayrı plazmid talamik nöronların az sayıda bir adım tekniği ile birlikte transfected. Bu yöntem TC nöronların bireysel aksonal türleri morfoloji ve presynaptic siteleri aynı anda görselleştirmek izin verdi. Yöntemi Ayrıca axon dallanma ve synapse oluşumu arasındaki nedensel ilişkiyi ortaya uzun vadeli gözlem etkin.

Introduction

Thalamocortical (TC) projeksiyon memeli beyinde axon rehberlik ve mekanizmaları hedefleme araştırmak için uygun bir sistemdir. Geliştirme sırasında duyusal TC aksonlar kortikal plaka ve formu şube ve sinapslarda tercihen içinde katman IV serebral korteks1,2birincil duyusal alanda büyümek. Temel bağlantılar kurulması sonra bile, aksonlar arbors ve sinaptik terminalleri çevresel değişiklikler3,4bağlı olarak yenilenmiş. Ancak, nasıl TC axon Morfoloji dinamik olarak değiştirilmez kötü anlaşılmaktadır. Bir tek hücre düzeyinde yapısal değişiklikleri gözlemlemek için yeterli bir teknik eksikliği ana nedenlerinden biri. Mikroskobu, İki fotonlu mikroskobu gibi son gelişmeler yaşayan kortikal nöronlar vivo içindedoğrudan gözlem izin vermiş, ancak genel TC yörüngeleri5, yakalamak için hala teknik sınırlamalar vardır 6. bu nedenle, vitro yöntemleri TC aksonlar canlı görüntüleme için axon dallanma ve synapse oluşumu yapısal analiz için güçlü araçlar sağlamak.

Bizim grup ilk kez bir statik dilim kültür yöntemi geçirgen membran7ile kurulmuş. Bu yöntemi kullanarak, bir sıçan kortikal dilim bir duyusal talamik blok ile cocultured ve lamina özgü TC bağlantıları bu organotypic cocultures7,8' recapitulated. Seyrek bir floresan protein ile etiketleme daha fazla TC axon büyüme ve dal oluşumu9,10,11gözlemlemek için bize izin. Son zamanlarda, dallanma, aynı anda görüntüleme için yeni bir yöntem geliştirdik ve bireysel TC aksonlar organotypic sinaps oluşumu12cocultures. TC akson ve presynaptic siteleri aynı anda görmek için DsRed ve EGFP etiketli synaptophysin (SYP-EGFP) talamik nöronların az sayıda organotypic coculture elektroporasyon tarafından ortak transfected. Geçerli yöntem TC aksonlar morfolojik analizi kolaylaştırır ve akson dallanma ve synapse oluşumu arasındaki nedensel ilişkiyi göstermek için kullanılan uzun vadeli gözlem için sağlar.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Osaka Üniversitesi ve Japonya Nörobilim Derneği hayvan refahı komiteleri tarafından kurulan esaslarına göre tüm deneyler yapıldı.

1. Organotypic cocultures, talamus ve serebral korteks

Not: özgün yayınlar7,8,13ile ilgili ayrıntılı yordamlar için bakın. Tüm yordamları steril koşullarda gerçekleştirilmesi gerekiyor. Sprague-Dawley (SD) fareler nöronal kültürler için kullanılır.

  1. Reaktifler hazırlıkları
    Not: Aşağıdaki reaktifler hacimleri bir sıçan beyin için vardır.
    1. Prepare 10 değiştirilmiş N2 ek x 13: insülin (50 μg/mL), progesteron (200 nM), hidrokortizon (200 nM), sodyum selenit (300 nM), transferrin (1 mg/mL), putrescine (1 mM), glikoz (60 mg/mL)
    2. Prepare serum içeren kültür orta (10 mL): %85 DMEM/F12, %10 10 x değiştiren N2 ek, % 5 fetal sığır serum (FBS)
    3. Prepare serum serbest kültür orta (20 mL): %90 DMEM/F12, %10 10 x değiştiren N2 ek
    4. Sıçan kuyruğu kollajen çözüm (0.5 mL) hazırlayın. Kısacası, steril koşullar altında bir sıçan kuyruk ihale lifleri al ve Asetik asit çözümde gecede kuluçkaya. Santrifüjü sonra süpernatant (bir kaç mg/mL) toplar ve bir buzdolabı13' te saklarız.
  2. Kültür yemeklerin hazırlanması
    1. Bir membran eklemek bir 35 mm Petri kabına yerleştirin.
    2. Membran için 40-50 μL sıçan kuyruk kollajen çözüm ekleyin ve kollajen çözüm merkezi etrafında yayılmış.
    3. Hava Kuru membran tamamen temiz bir Bank içinde.
    4. 1.5-2 mL serum içeren kültür orta çanağı içine koymak, böylece membran ile orta ıslatılır.
    5. Bir kuluçka (37 ° C, oksijen % 95 hava ve % 5 CO2) kaplama önce kültür çanak yerleştirin.
  3. Kortikal dilimleri hazırlanması
    1. Tüm cerrahi aletler % 70 etanol ile 10 dakika veya daha uzun sterilize.
    2. Doğum sonrası gün (P) 2 üzerinden hızlı bir şekilde tüm beynini incelememize fare (-buz birkaç dakikalığına dalmış) buz gibi anestezi altında.
    3. Yer 100 mm Petri kabına 100 mL soğuk Hanks içeren beynine dengeli tuz solüsyonu.
    4. Pia sorun beyinden iyi Forseps ile kaldırın ve kortikal dilimler (300-400 mikron kalınlık) görsel ve somatosensor korteks mikrocerrahi makasla kesip (ayrıntı için bkz: şekil 1).
      Not: Kortikal dilim kalınlığı yaklaşık Binoküler mikroskop altında Izgaralar ölçeğini tarafından tahmin edilmektedir.
      Not: Alternatif olarak, kortikal dilimleri bir vibratome steril koşullarda yapılabilir.
    5. Birkaç kortikal dilim membran INSERT bir tek kullanımlık plastik pipet ile üzerine aktarın.
    6. Kültür INSERT (Ayrıntılar için bkz:8,13) yangın cilalı Pasteur pipet ile Merkezi yakın dilim konumlarını ayarlamak ve aşırı orta gelen Ekle Kaldır.
      Not: Dilimleri hem gaz hem de orta yeterli miktarda almak için biraz aşağıda dilimleri orta düzeyde ayarlayın. Bu hücre canlılık için çok önemlidir.
    7. Yalnız bir gün önce talamik bir blok alınır ve yanında yerleştirilir için oksijen % 95 hava ve % 5 CO2ve kültür ortamında 37 ° C'de serum içeren kültür orta dilim korumak.
  4. Talamik blokları hazırlanması
    1. Tüm cerrahi aletler % 70 etanol ile 10 dakika veya daha uzun sterilize.
    2. A gebe iri fare (embriyonik gün 15) anestezi içeren Fentobarbital (50 mg/kg) mayi enjeksiyonu ile anestezi.
    3. Her embriyo rahim boynuzları üzerinden teşrih ve embriyoların bir 100 mm Petri kabına 100 mL soğuk Hanks dengeli tuz çözeltisi içeren yerleştirin.
    4. Binoküler mikroskop altında beyin her embriyo kaldırmak ve mikrocerrahi makas (bkz. şekil 1) kullanarak ventrobasal karmaşık ve yanal geniculate çekirdeği (yaklaşık 0.5 mm x 3)7 esas olarak içeren talamik blok kesme.
  5. Kültür ve organotypic cocultures korumak
    1. Pasteur pipet kullanarak, membran filtre üzerinde yerleştirilen kortikal dilimin ventrikül yüzey yanındaki blok talamik yerleştirin.
    2. Cocultures bir ortamda oksijen % 95 hava ve % 5 CO237 ° C'de serum içeren kültür ortamda korumak.
    3. Serum serbest kültür orta ile orta yarısı kültür iki gün sonra değişimi. Bundan sonra orta 2-3 günde değişimi.
      Not: Hücre hayatta kalmak için önemli olduğu gibi orta düzeyde orta değişiminden sonra kontrol edilmelidir.

2. adım

Tüm yordamları steril koşullarda gerçekleştirilmesi gerekiyor.

Not: Elektroporasyon bir gün dekolmanı blokların önlemek için talamik blokları hazırlanması sonra gerçekleştirin.

  1. Plazmid
    1. Plazmid karışımı aşağıdaki gibi yapmak: pCAGGS-DsRed 2 μg/μL; pCAG-SYP-EGFP 3.5 μg/μL.
      Not: Endotoksin-Alerjik Maxiprep seti kullanarak her iki plazmid arındırmak ve Hanks dengeli tuz solüsyonu içinde çözülür.
  2. Elektroporasyon ekipman kurulumu
    Şekil 2' de gösterildiği gibi bir uyarıcı ve bir izolatör gibi elektrikli aletleri bağlanması gerekir.
    1. Uyarıcı bifazik izolatör bağlayın.
    2. Bir elektrot (gümüş tel 0.2 mm çapında) izolatör negatif terminaline bağlayın.
    3. Bir elektrot (gümüş tel 1 mm çapında) serisi 100 Ω direnç ve izolatör pozitif terminal için bağlayın.
    4. Amplifikatör elektrik akımları ile amplifikatör gerilim ölçerek direnç iletilir olup olmadığını izlemek için osiloskop bağlayın.
  3. Cam Pipetler hazırlanması
    Not: Plazmid çözüm çýkartýlmasýný ve elektrik darbeleri uygulanması için iki tür cam Pipetler kullanılır.
    1. Pipetler cam kılcal bir elektrot çektirme ile üzerinden yapmak.
    2. Fırlatma pipet için belgili tanımlık uç (uç çapı 20-50 mikron olmalıdır) bölünürler.
    3. Eziyet ve ateş-(iç çap 50-200 μm kalınlığında olmalı) parlatma tarafından takip zımpara ile elektrot pipet ucu Lehçe.
      Not: Doğrudan doku dokunuyor gibi elektrot uç düz ve pürüzsüz, olmalıdır.
  4. Elektroporasyon prosedürü
    1. Fırlatma ve elektrot Pipetler için manipülatörler bağlayın.
    2. Gümüş tel (0.2 mm çap) elektrot pipet yerleştirin.
    3. Fırlatma pipet 1 mL şırınga ile bir plastik tüp takın.
    4. Almak yukarıya-> 5 μL plazmid çözüm içine şırınga emme tarafından fırlatma pipet.
    5. Elektroporasyon sahnede coculture koyun ve 1 mm çap elektrot kültür ortamı yerleştirin.
    6. Fırlatma pipet talamik explant yerleştirin.
    7. Talamik blok yüzeyine dokunduğundan sonra şırınga el ile itin.
      Not: Plazmid 0.5 μL hakkında çözüm genellikle bir talamik blok kullanılır.
    8. Elektrot pipet talamik blokta hemen fırlatma pipet retraksiyon sonra yerleştirin.
    9. Elektrik darbeleri (50-400 μA, 3-5 tren 1 ms süre 200 Hz'de 200 kare bakliyat) teslim. Genlik ve trenler osiloskop üzerinde sayısını izler.
      Not: Elektrik akımlarını genlik bir elektrot pipet13iç çap üzerinde bağlıdır.
    10. Elektrot pipet geri çek ve bulaşık kuluçka makinesi için dönün.
  5. Mikroskobik gözlem
    1. EGFP için iki filtre kümesi ile donatılmış bir dik confocal mikroskop mikroskobik bir sahnede kültür çanak koymak (uyarma, 488 nm; emisyon, 515 nm) ve DsRed (uyarma, 514 nm; emisyon, 565 nm).
    2. 10-25 optik bölümleri 1-7 µm-adım boyutlarında bir 20 X uzun çalışma mesafe objektif lens ile fotoğraf çekmek. Hem DsRed hem de SYP-EGFP hızlı tek tek ayırt etiketli aksonlar seçin.
      Not: Yaklaşık 0,7 x 0.7 mm (yani 1024 x 1024 piksele karşılık gelen, 0,68 mikron/piksel) gözlenen alandır.
    3. Esir alma imge her 24 saat için günlük düşsel. Oda sıcaklığında 10 dakika içinde tamamlamak ve kültürler için kuluçka dönün. Kısa-Aralık zaman atlamalı görüntüleme için kültür ortamının % 95 hava ve %5 37 ° C'de CO2 nemlendirilmelidir tutar bir kültür odasında devam et

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Deneme amaçları TC axon dallanma ve synapse oluşumu arasındaki ilişkiyi ortaya çıkarmak için burada açıklanan. Aynı anda aksonal yörüngeler ve yerleri presynaptic siteleri, tek veya organotypic cocultures bir kaç talamik hücrelerde görselleştirmek için kodlama SYP-EGFP ve DsRed elektroporasyon kullanarak iki Plasmid'ler ile transfected. Kültür ikinci haftasında tek tek ayırt TC aksonlar açıkça DsRed (şekil 3) tarafından etiketli. Sadece DsRed ve SYP-EGFP sergilenen aksonlar gözlem için seçildi. Etiketli TC aksonlar kortikal dilim işgal ve talamik aksonlar organotypic vivo içinde7, bulunan Laminer özgüllük benzeyen ile form dalları cocultures gösteren öncelikle en üst katmanında, dalları kurulmuş 8,10,14,15,16,17. Aynı zamanda, punctate toplamalardan SYP-EGFP (SYP-EGFP puncta) (şekil 3D-3F) TC DsRed etiketli akson gözlenen. Bu SYP-EGFP puncta çoğunlukla immunopositive sinyallerle genel postsinaptik belirtecidir, PSD95 ve presynaptic bir belirtecidir talamik hücre, VGLUT2 için colocalized büyük olasılıkla SYP-EGFP puncta çoğunlukla presynaptic temsil çünkü TC aksonlar12sitelerinde.

Daha fazla axon dallanma gösterdi TC aksonlar hızlandırılmış görüntüleme ve synapse oluşumu talamik nöronların sürekli ve dinamik toplama ve eleme (şekil 4) ile12. Ayrıca, çoğu dalları SYP-EGFP puncta, presynaptic siteleri (Ayrıntılar için bkz:12) dal oluşumu tetiklemek gösteren ortaya bulundu.

Figure 1
Resim 1 . Bir organotypic cocultures, talamus ve serebral korteks hazırlanması için yordam. (A) yenidoğan sıçan beyin üstten görünüm. İlk kesim orta hat (1) paralel yapılmıştır. Sonra 300 - 500 mikron kalınlığında koronal bölümleri birincil görsel ve somatosensor korteks (2) kesilir. Son olarak, kortikal dilimleri (3) elde etmek için uygun bir parasagittal olun. (B) A bir organotypic coculture, talamus ve serebral korteks şematik gösterimi. Doğum sonrası gün 2 fare üzerinden kortikal dilimleri ve embriyonik gün 15 talamik blok membran filtre cocultured. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 2
Resim 2 . Elektroporasyon için elektrikli aletleri bir şematik diyagramı. Uyarıcı, izolatör ve elektrot pipet seri bağlı. Olumsuz ücret DNA teslim elektrot pipet izolatör eksi terminali için bağlıdır. Elektroporasyon için elektrik akımları osiloskop ile izlenebilir. TH: talamus. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 3
Şekil 3 . Bir coculture kültür 2 hafta sonra Thalamocortical akson. (A-F) SYP-EGFP DsRed ile coexpression thalamocortical (TC) axon içinde. DsRed artı SYP-EGFP plazmid elektroporasyon kullanarak 1 gün vitro (DIV), kültürlü talamik hücreye kullanılmaya başlanmıştır. (A) bir organotypic coculture sonra 12 DIV. (B) A DsRed etiketli talamik hücre talamik ve kortikal dilim bir akson kortikal dilimde genişletir ve dalları üst katmanlarda oluşturur. (C) (A)kutulu bölgede bir büyütülmüş görüntüsü. (D-F) (C)kutulu bölgede DsRed etiketli TC axon (D) ve SYP-EGFP puncta (E) göster. SYP-EGFP ayrı birikimi tek bir TC akson gözlendi. İnci: talamus. Ölçek çubukları: (B) 1 mm, (C) 100 µm ve (F) 20 µm. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 4
Şekil 4 . Hızlandırılmış görüntüleme SYP-EGFP ve DsRed bir organotypic coculture ifade thalamocortical akson. DsRed artı SYP-EGFP plazmid 1 DIV, kültürlü talamik hücreye elektroporasyon kullanarak duyurdu. Bu axon günlük görüntüsü (14 DIV için 11 sayı) 4 gün içinde. Ölçek çubuğu: 50 µm. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Geçerli protokol de TC projeksiyon11dışında aksonlar büyüyen gelişim yönü eğitim için güçlü bir araçtır. Örneğin, kortikal dilim kültür ve elektroporasyon tekniği bir arada bireysel aksonal Morfoloji kortikal nöronlar ve uzun vadeli gözlem9,18görselleştirme sağlar.

Geçerli iletişim kuralını kullanarak, ilginç genler axon dallanma ve sinaps oluşumunda rol de floresan proteinler ve faiz genlerin eş ifade tarafından çözümlenebilir. Plazmid çözümleri molar oranı 1:218,19' a ayarlandığında genellikle, üzerinde floresan protein ifade hücreleri % 90'ı ikinci bir plazmid ile ortak transfected. Ancak, en iyi oranı co transfection etkinliği farklı olabilir ve ifade düzey vektörel çizimler arasında çeşitlidir.

Geçerli protokol hızlandırılmış deneyler için verimli olmasına rağmen bazı teknik sorunları vardır. Günlük görüntüleme için bir coculture mikroskobik bir sahnede her gün yerleştirildi. Aksonal geliştirme cidden günlük görüntüleme10tarafından etkilenmiş gibi görünmüyordu rağmen her gözlem buharlaşma kültür çözüm ve kültür ortamının pH değişiklikleri en aza indirmek için 10 dakika içinde tamamlanmalıdır. Alternatif olarak, sıcaklık, nem ve kültürlerinin mikroskobik sahne12pH korumak için daha iyi olurdu.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Yazarlar ifşa gerek yok.

Acknowledgments

Ayrıca Gabriel Hand eleştirel okuma için teşekkür ediyoruz.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
DMEM/F12 GIBCO 11320-033
Hanks’ balanced salt solution (HBSS) Nissui 5905
Fetal bovine serum (FBS) Thermo Scientific SH30396-03 Hyclone
Insulin Sigma I6634
Progesterone Sigma P8783
Hydrocortisone Sigma  H0888
Sodium selenite Wako Pure
Chemical Industries
192-10843
Transferrin  Sigma T1147
Putrescine  Sigma P5780
Glucose Wako
Pure Chemical Industries
16806-25
35 mm petri dishes Falcon 351008
Millicell-CM insert Millipore PICMORG50
100 mm petri dishes BIO-BIK I-90-20 petri dish sterrile
HiPure Plasmid Maxiprep Kit Invitrogen K210006
Disposable sterile plastic pipettes 202-IS transfer pipets sterile
Glass capillary: OD 1.2 mm Narishige  G-1.2 inner diameter, 1.2 mm
Silver wire: 0.2 and 1 mm  Nilaco AG-401265 (diameter, 0.2 mm), AG-401485 (diameter, 1.0 mm)
1 mL syringe Terumo SS-01T
Stimulator  A.M.P.I Master 8
Biphasic isolator  BAK ELECTRONICS BSI-2
Amplifier  A-M Systems Model 1800
Oscilloscope Hitachi VC-6723
Manipulator Narishige SM-15
Micromanipulator Narishige MO-10
Stereomicroscope  Olympus SZ40
Universal stand  Olympus SZ-STU2
Light illumination system  Olympus LG-PS2, LG-DI, HLL301
Electrode puller  Narishige PC-10
Confocal microscope Nikon Digital eclipse C1 laser
x20 objective Nikon ELWD 20x/0.45
Culture chamber Tokai Hit UK A16-U
Sprague-Dawley (SD) rat Japan SLC and Nihon-Dobutsu
Microsurgery scissors Natsume  MB-54-1

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Kageyama, G. H., Robertson, R. T. Development of geniculocortical projections to visual cortex in rat: evidence early ingrowth and synaptogenesis. J. Comp. Neurol. 335, (1), 123-148 (1993).
  2. Lopez-Bendito, G., Molnar, Z. Thalamocortical development: how are we going to get there. Nat. Rev. Neurosci. 4, (4), 276-289 (2003).
  3. Espinosa, J. S., Stryker, M. P. Development and plasticity of the primary visual cortex. Neuron. 75, (2), 230-249 (2012).
  4. Portera-Cailliau, C., Weimer, R. M., De Paola, V., Caroni, P., Svoboda, K. Diverse modes of axon elaboration in the developing neocortex. PLoS Biol. 3, (8), 272 (2005).
  5. Holtmaat, A., Svoboda, K. Experience-dependent structural synaptic plasticity in the mammalian brain. Nat. Rev. Neurosci. 10, (9), 647-658 (2009).
  6. Bhatt, D. H., Zhang, S., Gan, W. B. Dendritic spine dynamics. Annu Rev Physiol. 71, 261-282 (2009).
  7. Yamamoto, N., Kurotani, T., Toyama, K. Neural connections between the lateral geniculate nucleus and visual cortex in vitro. Science. 245, (4914), 192-194 (1989).
  8. Yamamoto, N., Yamada, K., Kurotani, T., Toyama, K. Laminar specificity of extrinsic cortical connections studied in coculture preparations. Neuron. 9, (2), 217-228 (1992).
  9. Uesaka, N., Hirai, S., Maruyama, T., Ruthazer, E. S., Yamamoto, N. Activity dependence of cortical axon branch formation: a morphological and electrophysiological study using organotypic slice cultures. J. Neurosci. 25, (1), 1-9 (2005).
  10. Uesaka, N., Hayano, Y., Yamada, A., Yamamoto, N. Interplay between laminar specificity and activity-dependent mechanisms of thalamocortical axon branching. J. Neurosci. 27, (19), 5215-5223 (2007).
  11. Uesaka, N., Nishiwaki, M., Yamamoto, N. Single cell electroporation method for axon tracing in cultured slices. Dev. Growth Differ. 50, (6), 475-477 (2008).
  12. Matsumoto, N., Hoshiko, M., Sugo, N., Fukazawa, Y., Yamamoto, N. Synapse-dependent and independent mechanisms of thalamocortical axon branching are regulated by neuronal activity. Dev Neurobiol. 76, (3), 323-336 (2016).
  13. Matsumoto, N., Sasaki, K., Yamamoto, N. Electroporation Method for Mammalian CNS Neurons in Organotypic Slice Cultures. Electroporation Methods in Neuroscience. 159-168 (2015).
  14. Molnar, Z., Blakemore, C. Lack of regional specificity for connections formed between thalamus and cortex in coculture. Nature. 351, (6326), 475-477 (1991).
  15. Bolz, J., Novak, N., Staiger, V. Formation of specific afferent connections in organotypic slice cultures from rat visual cortex cocultured with lateral geniculate nucleus. J. Neurosci. 12, (8), 3054-3070 (1992).
  16. Yamamoto, N., et al. Inhibitory mechanism by polysialic acid for lamina-specific branch formation of thalamocortical axons. J. Neurosci. 20, (24), 9145-9151 (2000).
  17. Yamamoto, N., et al. Characterization of factors regulating lamina-specific growth of thalamocortical axons. J Neurobiol. 42, (1), 56-68 (2000).
  18. Ohnami, S., et al. Role of RhoA in activity-dependent cortical axon branching. J. Neurosci. 28, (37), 9117-9121 (2008).
  19. Yamada, A., et al. Role of pre- and postsynaptic activity in thalamocortical axon branching. Proc Natl Acad Sci U S A. 107, (16), 7562-7567 (2010).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics