Nematodsynkronisering: En metod för att erhålla populationer av maskar i identiska utvecklingsstadier

Abstract

Källa: Sarasija, S. och Norman, K. R. Mätning av syreförbrukningshastigheter i intakt caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2019).

I den här videon visar vi en metod för att producera en utvecklingssynkroniserad population av steril vuxen C. elegans. Exempelprotokollet synkroniserar maskar för att studera syreförbrukningshastigheter hos levande djur.

Protocol

Detta protokoll är ett utdrag från Sarasija och Norman, Mätning av syreförbrukningshastigheter i intakt caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2019). 1. Tillväxt och synkronisering av nematodpopulationen Dessa djur kommer att nå L4 larvstadiet efter ~ 42 h. Flytta vid denna tidpunkt L4 larverna med ett platinaplock till OP50 sådda NGM-plattor som innehåller 0,5 mg/ml 5-fluor-2′-deoxyuridin (FUdR) för att förhindra att de p…

Representative Results

Tabell 1: Recept på NGM-plattor, M9-buffert och blekmedelslösning. M9 buffert (1 L) dH2O (på 2000) 1 000 ml Nacl 7 % KH2PO4 (kh2PO4) 1 % …

Materials

100 mm; 60 mm Petri dishes	Kord-Valmark Labware Products	2900; 2901
15 mL conical tubes	Corning	430791
50 mL conical tubes	Corning	430829
Agar	Fisher Scientific	BP1423-2
Bacto peptone	BD; Bacto	211677
Bacto tryptone	BD; Bacto	211705
Bacto yeast extract	BD; Bacto	212705
Bleach	Generic
Calcium chloride dihydrate (CaCl2·2H2O)	Fisher Scientific	C79-500
Cholesterol	Fisher Scientific	C314-500
Deionized water (dH2O)
Glass Pasteur pipettes	Krackeler Scientific	6-72050-900
Magnesium sulfate heptahydrate (MgSO4·7H2O)	Fisher Scientific	BP213-1
Potassium phosphate dibasic (K2HPO4)	Fisher Scientific	BP363-1
Potassium phosphate monobasic (KH2PO4)	Fisher Scientific	P285-500
Sodium chloride	Fisher Scientific	BP358-10
Sodium hydroxide (NaOH)	Fisher Scientific	BP359-500
Sodium phosphate dibasic anhydrous (Na2HPO4)	Fisher Scientific	BP332-1