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Method Article

Dissektion der Lymphdrüsenlarve: Isolierung des Drosophila-Hämozyten-produzierenden Organs

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April 30th, 2023

In This Article

Abstract

Quelle: Reimels, T. A. und Pfleger, C. M. Methoden zur Untersuchung der Lymphdrüse und der Hämozyten in Drosophila-Larven. J. Vis. Exp. (2016).

Dieses Video beschreibt die Drosophila-Lymphdrüse – die primäre Stelle der Hämatopoese in der Fliegenlarve – und zeigt ein Beispielprotokoll zum Sezieren und Montieren des Organs für Immunhistochemie und Fluoreszenzbildgebung.

Protocol

Dieses Protokoll ist ein Auszug aus Reimels und Pfleger, Methoden zur Untersuchung der Lymphdrüse und der Hämozyten in Drosophila-Larven, J. Vis. Exp. (2016).

1. Immunhistochemie der Lymphdrüsenlarve

HINWEIS: Die Lymphdrüse befindet sich etwa eine Drittellänge vom vorderen Ende einer Larve entfernt etwas unterhalb des Gehirns auf der dorsalen Seite. (Siehe Pfeil in Abbildung 1B.) Die Lymphdrüse flankiert das dorsale Gefäß und lässt sich am einfachsten an den Mundhaken oder am Gehirn befestigen. Wildtyp-Lymphdrüsen des dri....

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Results

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Abbildung 1: In vivo Melanisierung von Kristallzellen. A) Die Larven wurden vor dem Erhitzen einzeln in PCR-Röhrchen gelegt. Rote Pfeile zeigen Larven an, die sich nicht am Boden der Röhren befinden. B) Ein typisches Kristallzell-Melanisierungsmuster nach dem Erhitzen, bei dem manchmal die Lymphdrüse zum Vorschein kommt (Pfeil; auf der dorsalen Seite abgebildet, anterior link.......

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
PBS-TablettenMP Biomedizin2810305
PräparierschaleCorning7220-85
Mikrozentrifugen-RöhrchenDenvilleNr. C2170
Silikon-Präparierpad, hergestellt aus Sylgard 184 KitKrayden (vertrieben über Fisher)NC9644388 (Fisher-Katalognummer)Hergestellt in der Petrischale durch Mischen der Komponenten des Sylgard-Elastomer-Kits gemäß den Anweisungen des Herstellers.
stereomikroskopMorrell Instruments (Nikon-Händler)MNA42000, MMA36300Nikon-Modelle SMZ1000 und SMZ645
Tuch für TaschentücherVWRNr. 82003-820
ZangeElektronenmikroskopie72700-DZ
P200 PipetteEppendorf3120000054
FormaldehydFischerNr. BP531-500
TritonFischerNr. BP151-500
Tween 20FischerNr. BP337-500
Serumalbumin für RinderRocky Mountain BiologikaBSA-BSH-01K
Normales ZiegenserumSigmaNr. G9023-10ML
Normales EselserumSigmaArtikel-Nr.: D9663-10ML
200 Proof EthanolVWRNr. V1001
N-Propyl-GallatMP Biomedizin102747
GlycerinVWREM-4750
DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindol)FischerArtikel-Nr.: 62248
Mikroskop-Deckglas, 18 mm kreisförmigFischerTel.: 12-545-100
Objektträger für GlasmikroskopeFischerTel.: 22-034-980
24-Well-PlatteCorning351147
Einweg-TransferpipetteFischer13-711-9 Uhr
FluoreszenzmikroskopZeissAxio Imager.Z1

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