Обработка ног насекомых для флуоресценции микроскопии: метод сохранения нервно-мышечных структур для визуализации

Published: April 30, 2023

Abstract

Источник: Guan, W., et al. Visualize Drosophila Leg Motor Neuron Axons Through the Adult Cuticle. J. Vis. Exp. (2018).

Это видео описывает метод, чтобы вскрыть, исправить, и смонтировать drosophila взрослой ноги, сохраняя при этом его нейромускулатура нетронутыми для анализа изображений.

Protocol

Этот протокол является выдержкой из Guan et al., Visualize Drosophila Leg Motor Neuron Axons Through the Adult Cuticle, J. Vis. Exp. (2018). 1. Вскрытие и фиксация ног Возьмите стеклянную пластину из нескольких колодцев и заполните соответствующее количество колодцев 70% этанолом. Добавьте 15-20 CO2…

Representative Results

Рисунок 1: Процедура установки ног на слайдах микроскопа. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.

Materials

Ethanol absolute Fisher E/6550DF/17 Absolute analytical reagent grade
nonionic surfactant detergent Sigma-Aldrich T8787 Triton X-100, for molecular biology
Fine forceps Sigma-Aldrich F6521 Jewelers forceps, Dumont No. 5
Glass multi-well plate Electron Microscopy Sciences 71563-01 9 cavity Pyrex, 100 mm x 85 mm
PFA Thermofisher 28908 Pierc 16% Formaldehyde (w/v), Methanol-free
Glycerol Fisher BioReagents BP 229-1 Glycerol (Molecular Biology)
Spacers Sun Jin Lab Co IS006 iSpacer, four wells, around 12 μL working volume per well, 7 mm diameter, 0.18 mm deep
Square 22 mm x 22 mm coverslips Fisher Scientific FIS#12-541-B No. 1.5-0.16 to 0.19 mm thick
Mounting Medium Vector Laboratories H-1000 Vectashield Antifade Mounting Medium

Play Video

Cite This Article
Processing Insect Legs for Fluorescence Microscopy: A Method to Preserve Neuromuscular Structures for Imaging. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20121, doi: (2023).

View Video