Обработка ног насекомых для флуоресценции микроскопии: метод сохранения нервно-мышечных структур для визуализации

Abstract

Источник: Guan, W., et al. Visualize Drosophila Leg Motor Neuron Axons Through the Adult Cuticle. J. Vis. Exp. (2018).

Это видео описывает метод, чтобы вскрыть, исправить, и смонтировать drosophila взрослой ноги, сохраняя при этом его нейромускулатура нетронутыми для анализа изображений.

Protocol

Этот протокол является выдержкой из Guan et al., Visualize Drosophila Leg Motor Neuron Axons Through the Adult Cuticle, J. Vis. Exp. (2018). 1. Вскрытие и фиксация ног Возьмите стеклянную пластину из нескольких колодцев и заполните соответствующее количество колодцев 70% этанолом. Добавьте 15-20 CO2…

Representative Results

Рисунок 1: Процедура установки ног на слайдах микроскопа. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.

Materials

Ethanol absolute	Fisher	E/6550DF/17	Absolute analytical reagent grade
nonionic surfactant detergent	Sigma-Aldrich	T8787	Triton X-100, for molecular biology
Fine forceps	Sigma-Aldrich	F6521	Jewelers forceps, Dumont No. 5
Glass multi-well plate	Electron Microscopy Sciences	71563-01	9 cavity Pyrex, 100 mm x 85 mm
PFA	Thermofisher	28908	Pierc 16% Formaldehyde (w/v), Methanol-free
Glycerol	Fisher BioReagents	BP 229-1	Glycerol (Molecular Biology)
Spacers	Sun Jin Lab Co	IS006	iSpacer, four wells, around 12 μL working volume per well, 7 mm diameter, 0.18 mm deep
Square 22 mm x 22 mm coverslips	Fisher Scientific	FIS#12-541-B	No. 1.5-0.16 to 0.19 mm thick
Mounting Medium	Vector Laboratories	H-1000	Vectashield Antifade Mounting Medium