إعداد الخلايا النزفية الثابتة لاحتواء المناعة: طريقة عالية الإنتاجية لإصلاح وإزالة الغشاء الخارجي
Published: April 30, 2023
Abstract
المصدر: رادفورد، س. ج. ، ماكيم، ك. س. تقنيات لتصوير بروميتافاس وميتافيزي من ميوسيس الأول في الخلايا النزفية الثابتة. ج. فيس إكسب. (2016).
يمكن أن يكون التأني المناعي للبويضات في مرحلة متأخرة من دروسوفيلا تحديا بسبب الأغشية المحيطة بالبويضات. يصف هذا الفيديو طريقة عالية الإنتاجية للحصول على البويضات ، تثبيتها ، وإزالة الأغشية لاحتواء المناعة. يوضح البروتوكول المميز هذه التقنيات باستخدام البويضات في المراحل المتأخرة المستخدمة لتصور مراحل مختلفة من الإصابة بالخلايا النيوزية.
Protocol
هذا البروتوكول مقتطف من رادفورد ومكيم، وتقنيات التصوير بروميتافاس وميتافيزي من Meiosis الأول في الخلايا النزفية الثابتة، J. Vis. Exp. (2016). ملاحظة: يتم تنفيذ الإجراءات في درجة حرارة الغرفة ما لم يذكر خلاف ذلك. وتستخدم الحاضنات التي تسيطر عليها درجة الحرار?…
Representative Results
دواء المذيبات تركيز المخزون التركيز النهائي وقت العلاج أثر كولشيسين ايثانول 125 مليون متر 150 ميكرومتر 10 دقائق أو 30 دق?…
Materials
| 16% formaldehyde | Ted Pella, Inc. | 18505 | HAZARDOUS; once opened, discard after one month |
| 250 ml beakers | Various | ||
| 5 ml tubes | Various | ||
| active dry yeast | Various | mix with water to make a paste the consistency of peanut butter | |
| Binucleine 2 | Sigma | B1186 | HAZARDOUS |
| blender | Various | ||
| bovine serum albumin | Sigma | A4161 | |
| calcium chloride | Various | ||
| colchicine | Sigma | C-9754 | HAZARDOUS |
| coverslips | VWR | 48366-227 | No. 1 1/2 |
| DMSO | Various | ||
| EGTA | Various | ||
| ethanol | Various | ||
| forceps | Ted Pella, Inc. | 5622 | Dumont tweezers high precision grade style 5 |
| glass slides | VWR | 48312-003 | |
| glucose | Various | ||
| HEPES | VWR | EM-5330 | available from several venders |
| magnesium chloride | Various | ||
| large mesh (~1,500 µm) | VWR | AA43657-NK | variety of formats and other suppliers, 12 or 14 mesh |
| small mesh (~300 µm) | Spectrum labs | 146 424 | variety of formats, e.g., 146 422 or 146 486 |
| nutator | Various | ||
| Pasteur pipets | Various | ||
| potassium acetate | Various | ||
| Cacodylic acid | Sigma | C0125 | HAZARDOUS; alternatively, sodium cacodylate may be substituted |
| potassium hydroxide | Various | ||
| sodium acetate | Various | ||
| sodium hydroxide | Various | ||
| sucrose | Various | ||
| taxol (paclitaxel) | Sigma | T1912 | HAZARDOUS |
| Triton X-100 | Fisher | PI-28314 | |
| Tween 20 | Fisher | PI-28320 | |
| vortex | Various |
Cite This Article
Preparation of Fixed Drosophila Oocytes for Immunostaining: A High-Throughput Method to Fix and Remove the Outer Membrane. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20122, doi: (2023).