הכנת אוציטים קבועים של דרוזופילה לחיסון: שיטת תפוקה גבוהה לתיקון והסרה של הממברנה החיצונית
Published: April 30, 2023
Abstract
מקור: רדפורד, S. J., מק’קים, K. S. טכניקות להדמיה Prometaphase ו Metaphase של מיוזיס אני ב קבוע Drosophila Oocytes. ג’יי ויס אקספ. (2016).
חיסון של ביצות בשלב מאוחר Drosophila יכול להוכיח מאתגר בשל הממברנות שמסביב ביציות. סרטון זה מתאר שיטה בעלת תפוקה גבוהה להשגת ביציות, קיבעון והסרת ממברנות לחיסון. הפרוטוקול המוצג מדגים טכניקות אלה עם ביציות בשלב מאוחר המשמשות להמחשת שלבים שונים של מיוזיס.
Protocol
פרוטוקול זה מובא מתוך רדפורד ומקים, טכניקות להדמיית פרומטאפאז ומטאפאאז של מיוזיס I ב Drosophila קבוע Oocytes, J. Vis. Exp. (2016). שים לב: הנהלים מבוצעים בטמפרטורת החדר, אלא אם צוין אחרת. חממות מבוקרות טמפרטורה משמשות לשמירה על טמפרטורות לגידול זבובים וצלבים, אלא אם…
Representative Results
סמים הממס ריכוז מלאי ריכוז סופי זמן הטיפול אפקט קולכיצין אתנול 125 מ”מ 150 מיקרומטר 10 דקות או 30 דקות לערער את היצי…
Materials
| 16% formaldehyde | Ted Pella, Inc. | 18505 | HAZARDOUS; once opened, discard after one month |
| 250 ml beakers | Various | ||
| 5 ml tubes | Various | ||
| active dry yeast | Various | mix with water to make a paste the consistency of peanut butter | |
| Binucleine 2 | Sigma | B1186 | HAZARDOUS |
| blender | Various | ||
| bovine serum albumin | Sigma | A4161 | |
| calcium chloride | Various | ||
| colchicine | Sigma | C-9754 | HAZARDOUS |
| coverslips | VWR | 48366-227 | No. 1 1/2 |
| DMSO | Various | ||
| EGTA | Various | ||
| ethanol | Various | ||
| forceps | Ted Pella, Inc. | 5622 | Dumont tweezers high precision grade style 5 |
| glass slides | VWR | 48312-003 | |
| glucose | Various | ||
| HEPES | VWR | EM-5330 | available from several venders |
| magnesium chloride | Various | ||
| large mesh (~1,500 µm) | VWR | AA43657-NK | variety of formats and other suppliers, 12 or 14 mesh |
| small mesh (~300 µm) | Spectrum labs | 146 424 | variety of formats, e.g., 146 422 or 146 486 |
| nutator | Various | ||
| Pasteur pipets | Various | ||
| potassium acetate | Various | ||
| Cacodylic acid | Sigma | C0125 | HAZARDOUS; alternatively, sodium cacodylate may be substituted |
| potassium hydroxide | Various | ||
| sodium acetate | Various | ||
| sodium hydroxide | Various | ||
| sucrose | Various | ||
| taxol (paclitaxel) | Sigma | T1912 | HAZARDOUS |
| Triton X-100 | Fisher | PI-28314 | |
| Tween 20 | Fisher | PI-28320 | |
| vortex | Various |
Cite This Article
Preparation of Fixed Drosophila Oocytes for Immunostaining: A High-Throughput Method to Fix and Remove the Outer Membrane. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20122, doi: (2023).