면역 스테인링을 위한 고정 Drosophila Oocytes의 준비: 외부 멤브레인을 수정하고 제거하는 고처리량 방법

Abstract

출처: 래드포드, S. J., 맥킴, K. S. 이미징 프로메타페이즈 및 메오시스 1세의 메타상 고정 드로소필라 오사이클리스에 대한 기술. J. 비스 익스펙. (2016).

Drosophila 후기 단계 난모세포의 면역 염색은 난모세포의 주변 막 때문에 도전적인 증명할 수 있습니다. 이 비디오는 면역 스테인닝을 위한 난출물, 고정 및 멤브레인제거를 얻기 위한 고처리량 방법을 설명합니다. 이 프로토콜은 다양한 단계의 메이오시스를 시각화하는 데 사용되는 후기 단계 난모세포로 이러한 기술을 보여줍니다.

Protocol

이 프로토콜은 래드포드와 맥킴, 고정형 드로소필라 오사이클테스, J. Vis. Exp에서메이오시스 I의 이미징 프로메타페이즈와 메타상을 위한 기술에서 발췌된다. (2016). 참고: 별도로 명시되지 않는 한 절차는 실온에서 수행됩니다. 온도 조절 인큐베이터는 달리 언급하지 않는 한 플라이 리어잉 및 크로스온도를 유지하는 데 사용됩니다. <p c…

Representative Results

마약 용매 재고 농도 최종 농도 치료 시간 효과 콜치친 에탄올 125 mM 150 μM 10분 또는 30분 비키네토초레 불안정 (10 분)또는 모든 (30 분) 마이크로 투?…

Materials

16% formaldehyde	Ted Pella, Inc.	18505	HAZARDOUS; once opened, discard after one month
250 ml beakers	Various
5 ml tubes	Various
active dry yeast	Various		mix with water to make a paste the consistency of peanut butter
Binucleine 2	Sigma	B1186	HAZARDOUS
blender	Various
bovine serum albumin	Sigma	A4161
calcium chloride	Various
colchicine	Sigma	C-9754	HAZARDOUS
coverslips	VWR	48366-227	No. 1 1/2
DMSO	Various
EGTA	Various
ethanol	Various
forceps	Ted Pella, Inc.	5622	Dumont tweezers high precision grade style 5
glass slides	VWR	48312-003
glucose	Various
HEPES	VWR	EM-5330	available from several venders
magnesium chloride	Various
large mesh (~1,500 µm)	VWR	AA43657-NK	variety of formats and other suppliers, 12 or 14 mesh
small mesh (~300 µm)	Spectrum labs	146 424	variety of formats, e.g., 146 422 or 146 486
nutator	Various
Pasteur pipets	Various
potassium acetate	Various
Cacodylic acid	Sigma	C0125	HAZARDOUS; alternatively, sodium cacodylate may be substituted
potassium hydroxide	Various
sodium acetate	Various
sodium hydroxide	Various
sucrose	Various
taxol (paclitaxel)	Sigma	T1912	HAZARDOUS
Triton X-100	Fisher	PI-28314
Tween 20	Fisher	PI-28320
vortex	Various