Подготовка фиксированных drosophila Oocytes для иммуностиминга: метод высокой пропускной способности для исправления и удаления внешней мембраны
Published: April 30, 2023
Abstract
Источник: Рэдфорд, SJ, McKim, K. S. Методы для визуализации прометафазы и метафазы мейоза I в фиксированных drosophila Oocytes. J. Vis. Exp. (2016).
Иммуностинирование ооцитов дрозофилы на поздней стадии может оказаться сложной задачей из-за окружающих мембран яйцеклеток. Это видео описывает метод высокой пропускной способности для получения яйцеклеток, их фиксации и удаления мембран для иммуностимления. Рекомендуемый протокол демонстрирует эти методы с поздней стадии ооцитов, используемых для визуализации различных стадий мейоза.
Protocol
Этот протокол выдержки из Рэдфорд и Макким, Методы для визуализации прометазы и метафазы мейоза I в фиксированных drosophila Oocytes, J. Vis. Exp. (2016). ПРИМЕЧАНИЕ: Процедуры выполняются при комнатной температуре, если не указано иное. Контролируемые температ?…
Representative Results
лекарство растворитель Концентрация запасов Окончательная концентрация Время лечения эффект Колхицин этанол 125 мМ 150 МК?…
Materials
| 16% formaldehyde | Ted Pella, Inc. | 18505 | HAZARDOUS; once opened, discard after one month |
| 250 ml beakers | Various | ||
| 5 ml tubes | Various | ||
| active dry yeast | Various | mix with water to make a paste the consistency of peanut butter | |
| Binucleine 2 | Sigma | B1186 | HAZARDOUS |
| blender | Various | ||
| bovine serum albumin | Sigma | A4161 | |
| calcium chloride | Various | ||
| colchicine | Sigma | C-9754 | HAZARDOUS |
| coverslips | VWR | 48366-227 | No. 1 1/2 |
| DMSO | Various | ||
| EGTA | Various | ||
| ethanol | Various | ||
| forceps | Ted Pella, Inc. | 5622 | Dumont tweezers high precision grade style 5 |
| glass slides | VWR | 48312-003 | |
| glucose | Various | ||
| HEPES | VWR | EM-5330 | available from several venders |
| magnesium chloride | Various | ||
| large mesh (~1,500 µm) | VWR | AA43657-NK | variety of formats and other suppliers, 12 or 14 mesh |
| small mesh (~300 µm) | Spectrum labs | 146 424 | variety of formats, e.g., 146 422 or 146 486 |
| nutator | Various | ||
| Pasteur pipets | Various | ||
| potassium acetate | Various | ||
| Cacodylic acid | Sigma | C0125 | HAZARDOUS; alternatively, sodium cacodylate may be substituted |
| potassium hydroxide | Various | ||
| sodium acetate | Various | ||
| sodium hydroxide | Various | ||
| sucrose | Various | ||
| taxol (paclitaxel) | Sigma | T1912 | HAZARDOUS |
| Triton X-100 | Fisher | PI-28314 | |
| Tween 20 | Fisher | PI-28320 | |
| vortex | Various |
Cite This Article
Preparation of Fixed Drosophila Oocytes for Immunostaining: A High-Throughput Method to Fix and Remove the Outer Membrane. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20122, doi: (2023).