Иммуностинирование ооцитов дрозофилы на поздней стадии может оказаться сложной задачей из-за окружающих мембран яйцеклеток. Это видео описывает метод высокой пропускной способности для получения яйцеклеток, их фиксации и удаления мембран для иммуностимления. Рекомендуемый протокол демонстрирует эти методы с поздней стадии ооцитов, используемых для визуализации различных стадий мейоза.
Protocol
Этот протокол выдержки из Рэдфорд и Макким, Методы для визуализации прометазы и метафазы мейоза I в фиксированных drosophila Oocytes, J. Vis. Exp. (2016). ПРИМЕЧАНИЕ: Процедуры выполняются при комнатной температуре, если не указано иное. Контролируемые температ?…
Representative Results
лекарство растворитель Концентрация запасов Окончательная концентрация Время лечения эффект Колхицин этанол 125 мМ 150 МК?…
Materials
16% formaldehyde
Ted Pella, Inc.
18505
HAZARDOUS; once opened, discard after one month
250 ml beakers
Various
5 ml tubes
Various
active dry yeast
Various
mix with water to make a paste the consistency of peanut butter
Binucleine 2
Sigma
B1186
HAZARDOUS
blender
Various
bovine serum albumin
Sigma
A4161
calcium chloride
Various
colchicine
Sigma
C-9754
HAZARDOUS
coverslips
VWR
48366-227
No. 1 1/2
DMSO
Various
EGTA
Various
ethanol
Various
forceps
Ted Pella, Inc.
5622
Dumont tweezers high precision grade style 5
glass slides
VWR
48312-003
glucose
Various
HEPES
VWR
EM-5330
available from several venders
magnesium chloride
Various
large mesh (~1,500 µm)
VWR
AA43657-NK
variety of formats and other suppliers, 12 or 14 mesh
small mesh (~300 µm)
Spectrum labs
146 424
variety of formats, e.g., 146 422 or 146 486
nutator
Various
Pasteur pipets
Various
potassium acetate
Various
Cacodylic acid
Sigma
C0125
HAZARDOUS; alternatively, sodium cacodylate may be substituted
Preparation of Fixed Drosophila Oocytes for Immunostaining: A High-Throughput Method to Fix and Remove the Outer Membrane. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20122, doi: (2023).