İmmünostaining için Sabit Drosophila Oositlerinin Hazırlanması: Dış Zarı Düzeltmek ve Çıkarmak için Yüksek Verimli Bir Yöntem
Published: April 30, 2023
Abstract
Kaynak: Radford, S. J., McKim, K. S. Sabit Drosophila Oositlerinde I. Meiosis Prometaphaz ve Metafaz Görüntüleme Teknikleri. J. Vis. Exp. (2016).
Drosophila geç evre oositlerin immünostaining oositler çevreleyen membranlar nedeniyle zor kanıtlayabilir. Bu videoda, oositler, fiksasyonları ve membranların immünostaining için çıkarılması için yüksek verimli bir yöntem açıklanmaktadır. Öne çıkan protokol, bu teknikleri meyozun farklı aşamalarını görselleştirmek için kullanılan geç evre oositlerle göstermektedir.
Protocol
Bu protokol Radford ve McKim, Sabit Drosophila Oocytes, J. Vis. Exp’te I.Meiosis’i Görüntüleme Teknikleri ve Metafaz’dan alıntılanmıştır. (2016). NOT: Aksi belirtilmedikçe prosedürler oda sıcaklığında gerçekleştirilir. Sıcaklık kontrollü inkübatörler, aksi belirtilmedikçe sinek yetiştirme ve haçlar için sıcaklıkları korumak için kullanılır. 1. Hazırlıklar Sinekleri hazırlay?…
Representative Results
Uyuşturucu Solvent Stok konsantrasyonu Son konsantrasyon Tedavi zamanı Etkisi kolşicine Etanol 125 mM 150 μM 10 dk veya 30 dk kinetochore olmayan istikrarı boz (10 dk)veya tüm (30 dk) mikro…
Materials
| 16% formaldehyde | Ted Pella, Inc. | 18505 | HAZARDOUS; once opened, discard after one month |
| 250 ml beakers | Various | ||
| 5 ml tubes | Various | ||
| active dry yeast | Various | mix with water to make a paste the consistency of peanut butter | |
| Binucleine 2 | Sigma | B1186 | HAZARDOUS |
| blender | Various | ||
| bovine serum albumin | Sigma | A4161 | |
| calcium chloride | Various | ||
| colchicine | Sigma | C-9754 | HAZARDOUS |
| coverslips | VWR | 48366-227 | No. 1 1/2 |
| DMSO | Various | ||
| EGTA | Various | ||
| ethanol | Various | ||
| forceps | Ted Pella, Inc. | 5622 | Dumont tweezers high precision grade style 5 |
| glass slides | VWR | 48312-003 | |
| glucose | Various | ||
| HEPES | VWR | EM-5330 | available from several venders |
| magnesium chloride | Various | ||
| large mesh (~1,500 µm) | VWR | AA43657-NK | variety of formats and other suppliers, 12 or 14 mesh |
| small mesh (~300 µm) | Spectrum labs | 146 424 | variety of formats, e.g., 146 422 or 146 486 |
| nutator | Various | ||
| Pasteur pipets | Various | ||
| potassium acetate | Various | ||
| Cacodylic acid | Sigma | C0125 | HAZARDOUS; alternatively, sodium cacodylate may be substituted |
| potassium hydroxide | Various | ||
| sodium acetate | Various | ||
| sodium hydroxide | Various | ||
| sucrose | Various | ||
| taxol (paclitaxel) | Sigma | T1912 | HAZARDOUS |
| Triton X-100 | Fisher | PI-28314 | |
| Tween 20 | Fisher | PI-28320 | |
| vortex | Various |
Cite This Article
Preparation of Fixed Drosophila Oocytes for Immunostaining: A High-Throughput Method to Fix and Remove the Outer Membrane. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20122, doi: (2023).