免疫染色のための固定 ショウジョウバエ の調製:外膜を固定・除去する高スループット法

Abstract

出典:ラドフォード、S.J.、マッキム、K.S. イメージングのための技術 プロメタフェーズとMeiosis Iのメタフェーズを固定ショ ウジョウバエオー サイトで. J. ヴィス・エクス (2016).

ショウジョウバエ後期卵母細胞の免疫染色は、卵母細胞の周囲の膜のために困難であることが証明できる。このビデオでは、卵母細胞、それらの固定、および免疫染色のための膜の除去を得るためのハイスループット方法について説明します。注目のプロトコルは、異なる段階のmeiosisを視覚化するために使用される後期卵母細胞を用いてこれらの技術を示す。

Protocol

このプロトコルは、ラドフォードとマッキムから抜粋されています, イメージング前形相と Meiosis Iのメタフェーズのための技術は、固定ショウジョウバエオオサイテスで, J. Vis. Exp.(2016). 注: 手順は、特に明記されていない限り、室温で行われます。温度管理インキュベーターは、特に断らない限り、フライの飼育と交差のための温度を…

Representative Results

薬 溶媒 在庫集中 最終濃度 治療時間 影響 コルヒチン エタノール 125 mM 150 μM 10分または30分 非キネトコレを不安定化させる(10分)またはすべて(30?…

Materials

16% formaldehyde	Ted Pella, Inc.	18505	HAZARDOUS; once opened, discard after one month
250 ml beakers	Various
5 ml tubes	Various
active dry yeast	Various		mix with water to make a paste the consistency of peanut butter
Binucleine 2	Sigma	B1186	HAZARDOUS
blender	Various
bovine serum albumin	Sigma	A4161
calcium chloride	Various
colchicine	Sigma	C-9754	HAZARDOUS
coverslips	VWR	48366-227	No. 1 1/2
DMSO	Various
EGTA	Various
ethanol	Various
forceps	Ted Pella, Inc.	5622	Dumont tweezers high precision grade style 5
glass slides	VWR	48312-003
glucose	Various
HEPES	VWR	EM-5330	available from several venders
magnesium chloride	Various
large mesh (~1,500 µm)	VWR	AA43657-NK	variety of formats and other suppliers, 12 or 14 mesh
small mesh (~300 µm)	Spectrum labs	146 424	variety of formats, e.g., 146 422 or 146 486
nutator	Various
Pasteur pipets	Various
potassium acetate	Various
Cacodylic acid	Sigma	C0125	HAZARDOUS; alternatively, sodium cacodylate may be substituted
potassium hydroxide	Various
sodium acetate	Various
sodium hydroxide	Various
sucrose	Various
taxol (paclitaxel)	Sigma	T1912	HAZARDOUS
Triton X-100	Fisher	PI-28314
Tween 20	Fisher	PI-28320
vortex	Various