इम्यूनोस्टेपिंग के लिए फिक्स्ड ड्रोसोफिला ओसाइट्स की तैयारी: बाहरी झिल्ली को ठीक करने और हटाने के लिए एक उच्च-थ्रूपुट विधि
Published: April 30, 2023
Abstract
स्रोत: रेडफोर्ड, एस जे, मैककिम, इमेजिंग प्रोमेटेफेज के लिए के एस तकनीक और फिक्स्ड ड्रोसोफिला ओसाइट्स में मेयोसिस I के मेटाफेज। जे विस एक्सप्रेस। (2016).
ड्रोसोफिला देर से चरण के ओसाइट्स का इम्यूनोस्टेटिंग ओसाइट्स के आसपास की झिल्ली के कारण चुनौतीपूर्ण साबित हो सकता है। यह वीडियो ओसाइट्स प्राप्त करने, उनके निर्धारण और इम्यूनोदाता के लिए झिल्ली को हटाने के लिए एक उच्च-थ्रूपुट विधि का वर्णन करता है। विशेष रुप से प्रदर्शित प्रोटोकॉल इन तकनीकों को दर्शाता है जिसमें देर से चरण के ओसाइट्स का उपयोग मेयोसिस के विभिन्न चरणों की कल्पना करने के लिए किया जाता है।
Protocol
यह प्रोटोकॉल रेडफोर्ड और मैककिम, इमेजिंग प्रोमेटाफेज के लिए तकनीक और फिक्स्ड ड्रोसोफिला ओसाइट्स, जे विस एक्सपीमें मेयोसिस I के मेटाफेज से कुछ अंश है। (2016). नोट: प्रक्रियाओं ?…
Representative Results
दवा विलायक स्टॉक एकाग्रता अंतिम एकाग्रता उपचार का समय सामान कोल्चिसिन एथनॉल 125 mM 150 मा?…
Materials
| 16% formaldehyde | Ted Pella, Inc. | 18505 | HAZARDOUS; once opened, discard after one month |
| 250 ml beakers | Various | ||
| 5 ml tubes | Various | ||
| active dry yeast | Various | mix with water to make a paste the consistency of peanut butter | |
| Binucleine 2 | Sigma | B1186 | HAZARDOUS |
| blender | Various | ||
| bovine serum albumin | Sigma | A4161 | |
| calcium chloride | Various | ||
| colchicine | Sigma | C-9754 | HAZARDOUS |
| coverslips | VWR | 48366-227 | No. 1 1/2 |
| DMSO | Various | ||
| EGTA | Various | ||
| ethanol | Various | ||
| forceps | Ted Pella, Inc. | 5622 | Dumont tweezers high precision grade style 5 |
| glass slides | VWR | 48312-003 | |
| glucose | Various | ||
| HEPES | VWR | EM-5330 | available from several venders |
| magnesium chloride | Various | ||
| large mesh (~1,500 µm) | VWR | AA43657-NK | variety of formats and other suppliers, 12 or 14 mesh |
| small mesh (~300 µm) | Spectrum labs | 146 424 | variety of formats, e.g., 146 422 or 146 486 |
| nutator | Various | ||
| Pasteur pipets | Various | ||
| potassium acetate | Various | ||
| Cacodylic acid | Sigma | C0125 | HAZARDOUS; alternatively, sodium cacodylate may be substituted |
| potassium hydroxide | Various | ||
| sodium acetate | Various | ||
| sodium hydroxide | Various | ||
| sucrose | Various | ||
| taxol (paclitaxel) | Sigma | T1912 | HAZARDOUS |
| Triton X-100 | Fisher | PI-28314 | |
| Tween 20 | Fisher | PI-28320 | |
| vortex | Various |
Cite This Article
Preparation of Fixed Drosophila Oocytes for Immunostaining: A High-Throughput Method to Fix and Remove the Outer Membrane. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20122, doi: (2023).