Temperatur gradient analyse: En metode for å teste temperaturpreferanse i Drosophila larver

Abstract

Kilde: Liu, J., et al. A Temperature Gradient Assay to Determine Thermal Preferences of Drosophila Larvae. J. Vis. Utt. (2018).

Drosophila fruktfluer kan skille små temperaturendringer og derfor velge miljøer med gunstige termiske forhold. Denne videoen beskriver en atferdsanalyse som tester temperaturpreferansen til Drosophila larver på en lineær termisk gradient.

Protocol

Denne protokollen er et utdrag fra Liu et al. En temperaturgradientanalyse for å bestemme termiske preferanser for Drosophila Larver, J. Vis. Exp. (2018). 1. Oppsett av temperaturgradient Klargjøre enveis forløpning For å skape et fuktig omgivelsesmiljø under analysene, plasser de to aluminiumsblokkene som er koblet til to vannbad på våte papirhåndklær, separert med 10 cm (Figur 1A). <li…

Representative Results

Figur 1: Oppsett av enkelt- og toveis gradientanalyse. (A) Enveis gradientoppsett med to aluminiumsanalyseplater på to aluminiumsblokker. Temperaturene på aluminiumsblokkene styres ved å sirkulere vann fra to vannbad. (B) Arrangementet av de tre aluminiumsblokkene, vannbadene og en aluminiumsplate (250 x 220 mm) for en toveis gradient. Venstre og høyre blokker er koblet til samme vann…

Materials

Gradient assay apparatus
PolyScience 9106, Refrigerated/Heated 6L Circulating Bath	Thomas Scientific	9106	This model is discontinued. Updated replacement models include: 1186R00 and 1197U04 for 120 V, 60 Hz, or 1184L08 and 1197U04 for 240 V, 50 Hz.
Aluminum assay plate (for single directional gradient)			Outer size: 14 x 10.1 x 0.9 cm, inner size: 12.9 x 8.7 x 0.8 cm, black anodized.
Aluminum plate (for bidirectional gradient)			25 x 22 x 0.2 cm, black anodized.
Aluminum block			Outer size: 25.5 x 5 x 1.4 cm, parameters of inner channels are shown in Figure 1D.
Connector for aluminum blocks and tubing	McMaster-Carr	91355K82
Tygon Sanitary Silicone Tubing	Tygon	57296	1/4" ID x 3/8" OD x 1/16" wall
Name	Company	Catalog Number	Comments
Items and reagents for assay
Pestle	USA Scientific	17361	Pestle for 1.5 mL microcentrifuge tubes
Thermometer	Fluke	51II
Thermocouple	Fluke	K type
Universal microplate lid	Corning	6980A77
35 mm dish	Corning	9380D40
Labeling tape (for bidirectional gradient)	Fisher Scientific	15-951	Fisherbrand labeling tape 2 in x 14 yds
Agarose	Invitrogen	16500500	Prepare 1% solution
Sucrose	Sigma	S0389-5KG	Prepare 18% solution right before starting assay
Paint brush	Fisher Scientific	11860
50 mL centrifuge tubes	Denville	C1062-P
Scoopula	Fisher Scientific	14-357Q
500 mL round wide-mouth bottle	Pyrex	1395-500
Cell strainer (300 mm pore)	PluriSelect	43-50300	Optional item for larvae washing
Cardboard box (vial tray)	Genesee Scientific	FS32-124