Analisi della durata della vita: misurazione della longevità di C. elegans

Abstract

Fonte: Cornwell, A.B., et al. Il metodo del set di repliche: un approccio ad alta produttività per misurare quantitativamente caenorhabditis elegans Lifespan. J. Vis. Exp.  (2018).

Questo video descrive un metodo tradizionale basato su lastre per misurare la durata di vita di C. elegans. Il protocollo di esempio misura la durata dei worm trattati con RNAi.

Protocol

Il seguente protocollo è un estratto da Cornwell et al, The Replica Set Method: A High-throughput Approach to Quantitatively Measure Caenorhabditis elegans Lifespan, J. Vis. Exp.  (2018). 1. Prevenire la produzione di progenie con l’aggiunta di 5-Fluoro-2′-deossiuridina (FUdR) Far crescere gli animali fino allo stadio L4 a 20 °C. Ver…

Representative Results

Figura 1: Il metodo tradizionale e il metodo del set di repliche per il punteggio della durata della vita dei C.elegans (A). Il metodo tradizionale per segnare la durata della vita di C. elegans. Nel tempo vengono seguite diverse piccole popolazioni sincronizzate di animali isogenici per condizione. La stessa popolazione di animali viene seguita durant…

Materials

FuDR (5-Fluoro-2'-deoxyuridine)	Alfa Aesar	L16497
24 Well Culture Plates	Greiner Bio-One	#662102
600 µL 96-well plates	Greiner Bio-One	#786261
2mL 96-well plates	Greiner Bio-One	#780286
96-pin plate replicator	Nunc	250520
C. elegans RNAi clone library in HT115 bacteria- Ahringer	Source Bioscience	C. elegans RNAi Collection (Ahringer)	See also Kamath et. al, Nature 2003.
C. elegans RNAi clone library in HT115 bacteria- Vidal	Source Bioscience	C. elegans ORF-RNAi Resource (Vidal)	See also Rual et. al, Genome Research 2004. This library is also available from Dharmacon.
L4440 Empty Vector Plasmid	Addgene	1654	https://www.addgene.org/1654/