Este vídeo descreve um método tradicional, baseado em placas, de medir a vida útil de C. elegans. O protocolo de exemplo mede a vida útil dos vermes tratados com RNAi.
Protocol
O seguinte protocolo é um trecho de Cornwell et al, The Replica Set Method: A High-throughput Approach to Quantitatively Measure Caenorhabditis elegans Lifespan, J. Vis. Exp. (2018). 1. Prevenção da produção de progênero pela adição de 5-Fluoro-2′-desoxyuridina (FUdR) Cresça animais até a etapa L4 a 20 °C. Verifique se os a…
Representative Results
Figura 1: O Método Tradicional e o Conjunto de Réplicas para pontuação de vida útil C.elegans (A). O Método Tradicional para marcar A vida útil de C. elegans. Várias pequenas populações sincronizadas de animais isogênicos por condição são seguidas ao longo do tempo. A mesma população de animais é acompanhada ao longo do curso de estudo…
Materials
FuDR (5-Fluoro-2'-deoxyuridine)
Alfa Aesar
L16497
24 Well Culture Plates
Greiner Bio-One
#662102
600 µL 96-well plates
Greiner Bio-One
#786261
2mL 96-well plates
Greiner Bio-One
#780286
96-pin plate replicator
Nunc
250520
C. elegans RNAi clone library in HT115 bacteria- Ahringer
Source Bioscience
C. elegans RNAi Collection (Ahringer)
See also Kamath et. al, Nature 2003.
C. elegans RNAi clone library in HT115 bacteria- Vidal
Source Bioscience
C. elegans ORF-RNAi Resource (Vidal)
See also Rual et. al, Genome Research 2004. This library is also available from Dharmacon.