Abstract
Kilde: Cornwell, A.B., et al. Replica Set-metoden: En høy gjennomstrømningstilnærming for kvantitativt måling av Caenorhabditis elegans levetid. J. Vis. Utt. (2018).
Denne videoen beskriver en tradisjonell, platebasert metode for å måle levetiden til C. elegans. Eksempelprotokollen måler levetiden til ormer behandlet med RNAi.
Protocol
Følgende protokoll er et utdrag fra Cornwell et al, The Replica Set Method: A High-throughput Approach to Quantitatively Measure Caenorhabditis elegans Lifespan, J. Vis. Exp. (2018). 1. Forhindre avkomproduksjon ved tilsetning av 5-Fluoro-2′-deoksyuridin (FUdR) Dyr dyr til L4 stadium ved 20 °C. Kontroller om synkroniserte dyr har ut…
Representative Results
Figur 1: Den tradisjonelle metoden og replikasettet for å skåre C.elegans levetid (A). Den tradisjonelle metoden for å score C. elegans levetid. Flere små synkroniserte populasjoner av isogene dyr per tilstand følges over tid. Den samme populasjonen av dyr følges gjennom hele studiekurset. Levedyktighet vurderes ved bevegelse, som kan stimuleres a…
Materials
| FuDR (5-Fluoro-2'-deoxyuridine) | Alfa Aesar | L16497 | |
| 24 Well Culture Plates | Greiner Bio-One | #662102 | |
| 600 µL 96-well plates | Greiner Bio-One | #786261 | |
| 2mL 96-well plates | Greiner Bio-One | #780286 | |
| 96-pin plate replicator | Nunc | 250520 | |
| C. elegans RNAi clone library in HT115 bacteria- Ahringer | Source Bioscience | C. elegans RNAi Collection (Ahringer) | See also Kamath et. al, Nature 2003. |
| C. elegans RNAi clone library in HT115 bacteria- Vidal | Source Bioscience | C. elegans ORF-RNAi Resource (Vidal) | See also Rual et. al, Genome Research 2004. This library is also available from Dharmacon. |
| L4440 Empty Vector Plasmid | Addgene | 1654 | https://www.addgene.org/1654/ |
Cite This Article
Lifespan Analysis: Measuring C. elegans Longevity. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20155, doi: (2023).