Summary
यह आलेख गैर-निरंतर ऊतक इंजीनियरिंग के लिए कक्ष संरेखण को विनियमित करने के लिए एक गाढ़ा सेल से लदी hydrogel पर ग्रैडिएंट स्थिर उपभेदों प्रदान करने के लिए एक सरल दृष्टिकोण का परिचय देता है।
Abstract
सेलुलर संरेखण के लिए कृत्रिम मार्गदर्शन ऊतक इंजीनियरिंग के क्षेत्र में एक गर्म विषय है। पिछले अनुसंधान के सबसे है जांच की एकल तनाव प्रेरित सेलुलर संरेखण पर एक सेल से लदी hydrogel जटिल प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं और बड़े पैमाने पर सिस्टम को नियंत्रित करने, जो आमतौर पर प्रदूषण के मुद्दों के साथ जुड़े रहे हैं का उपयोग करके। इस प्रकार, इस आलेख में, हम एक 3D hydrogel में सेलुलर व्यवहार की उत्तेजना के लिए एक प्लास्टिक PDMS कवर और एक यूवी पारदर्शी कांच सब्सट्रेट के साथ एक फ्लुडिक चिप का उपयोग एक ग्रैडिएंट स्थिर तनाव निर्माण करने के लिए एक सरल दृष्टिकोण का प्रस्ताव। फोटो-patternable सेल prepolymer अधिक लदान फ्लुडिक चैंबर में कवर पर एक उत्तल घुमावदार PDMS झिल्ली उत्पन्न कर सकते हैं। यूवी के बाद crosslinking, घुमावदार PDMS झिल्ली, और बफ़र धोने, जांच कक्ष के लिए एक microenvironment के तहत एक गाढ़ा परिपत्र micropattern के माध्यम से ढाल उपभेदों की एक किस्म के तहत व्यवहार है स्वयं में एक एकल चिप फ्लुडिक बाह्य उपकरणों के बिना स्थापित। NIH3T3 कोशिकाओं ज्यामिति मार्गदर्शन, तनाव उत्तेजना, जो hydrogels पर 15-65% से अलग के साथ सहयोग में सेलुलर संरेखण प्रवृत्ति में परिवर्तन देख के बाद का प्रदर्शन किया गया। एक 3-दिन ऊष्मायन के बाद, hydrogel ज्यामिति कक्ष संरेखण के कम compressive दबाव, जहाँ कोशिकाओं hydrogel बढ़ाव दिशा के उच्च compressive दबाव के साथ गठबंधन का प्रभुत्व है। ये बीच, कट्टरपंथी मार्गदर्शन के अपव्यय के कारण यादृच्छिक संरेखण hydrogel बढ़ाव और नमूनों hydrogel की ज्यामिति के मार्गदर्शन के कक्षों से पता चला।
Introduction
एक देशी microenvironment mimics एक ब्लॉक सामग्री के रूप में सेवारत, एक hydrogel extracellular मैट्रिक्स (ECM) से युक्त biomimetic ऊतक scaffolds सेल के विकास का समर्थन करने के लिए फिर से निर्माण कर सकते हैं। एक ऊतक के कार्यों के अधिकारी के लिए, संगठित कक्ष संरेखण एक अनिवार्य आवश्यकता है। विभिन्न (यानी, एक सतह पर सुसंस्कृत कोशिकाओं) 2D और 3 डी (यानी, कोशिकाओं में एक hydrogel समझाया) कक्ष संरेखण संवर्धन या कोशिकाओं या सूक्ष्म के साथ लचीला substrates पर encapsulating द्वारा हासिल किया गया है- या नैनो-पैटर्न1। 3D कक्ष संरेखण microarchitecture में अधिक आकर्षक, के रूप में microenvironment मूल ऊतक का निर्माण2,3,4करने के लिए करीब है। 3D कक्ष संरेखण के लिए एक सामान्य दृष्टिकोण hydrogel आकृति2,3के ज्यामितीय क्यू है। लघु-अक्ष दिशा में सेल प्रसार के लिए सीमित स्थान के कारण, एक माइक्रो-नमूनों hydrogel में लंबे अक्ष दिशा के साथ संरेखित करने के लिए कक्षों का लक्ष्य। तन्यता खिंचाव कक्ष संरेखण खिंचाव दिशा4,5करने के लिए समानांतर को प्राप्त करने के लिए hydrogels करने के लिए लागू करने के लिए एक और दृष्टिकोण है।
ECM hydrogels, compressive तनाव जैसे पर biophysical उत्तेजना या एक विद्युत क्षेत्र, कक्ष कार्यों के लिए उचित ऊतक एकीकरण, प्रसार और भेदभाव1,2,3को विनियमित कर सकते हैं। एक तनाव की स्थिति को एक ही समय में एकाधिक यांत्रिक नियंत्रण इकाइयों4,6,7,8,9का उपयोग कर लागू करने से सेलुलर व्यवहार की जांच करने के लिए अधिक से अधिक शोध किया गया है। उदाहरण के लिए, यांत्रिक चरण मोटर्स का उपयोग निचोड़ा हुआ या फैला एक 3 डी सेल-समझाया कोलेजन hydrogel पर एक आम दृष्टिकोण7,10किया गया है। हालांकि, इस तरह नियंत्रित करना उपकरण अतिरिक्त स्थान की आवश्यकता है और इनक्यूबेटर7,9,11,12में प्रदूषण की समस्या का सामना। इसके अलावा, बड़े साधन उच्च reproducibility की13प्रदान करने के लिए एक सटीक नियंत्रण पर्यावरण दे सकते हैं।
यह देखते हुए कि सेल से लदी hydrogels आम तौर पर सूक्ष्म जैव चिकित्सा अनुप्रयोगों के लिए बड़े पैमाने पर नियोजित कर रहे हैं, यह MEMS तकनीकों तनाव/खिंचाव उत्तेजना एक साथ 3D biomimetic constructs इन विट्रो में2,14,15,16,17,18में सेल व्यवहार की जांच करने के लिए की एक श्रृंखला जनरेट करने के लिए गठबंधन करने के लिए लाभप्रद है। उदाहरण के लिए, PDMS झिल्ली microfluidic चिप्स में ख़राब करने के लिए गैस के दबाव का उपयोग कर वृद्धि विभिन्न उपभेदों, कोशिका अवकलन विभिन्न प्रजातियों9,16करने के लिए ड्राइविंग के लिए दे सकते हैं। हालांकि, वहाँ कई तकनीकी चुनौतियों, जैसे जटिल चिप निर्माण प्रक्रियाओं में एक साफ कमरे और सॉफ्टवेयर नियंत्रण एकीकरण मोटर्स, पंप, वाल्व, और संपीड़ित गैसों के हैं।
इस काम में, हम एक आत्मनिर्भर ढाल स्थैतिक-तनाव microfluidic चिप एक गाढ़ा परिपत्र hydrogel पैटर्न और एक लचीला PDMS झिल्ली द्वारा रोजगार प्राप्त करने के लिए एक सरल दृष्टिकोण प्रदर्शित करता है। अधिकांश मौजूदा दृष्टिकोण के विपरीत, हमारे मंच एक पोर्टेबल और डिस्पोजेबल लघु डिवाइस कि एक पीला कमरे के बाहर गढ़े जा सकते हैं और जो पास गाढ़ा सेल-समझाया hydrogels, ऊष्मायन के दौरान बाह्य यांत्रिक उपकरणों के बिना पर ग्रैडिएंट उपभेदों स्व-जनरेट कर रहा है। 3T3 fibroblast सेल व्यवहार hydrogel आकृति का एक संयोजन द्वारा प्रभावित और तन्यता खिंचाव मार्गदर्शन cues के एक किस्म 3 दिनों के लिए ग्रेडिएंट तनाव चिप में 3 डी ECM mimetic वातावरण के भीतर कक्ष संरेखण के अवलोकन के दौरान प्रदर्शन किया गया।
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Representative Results
पूर्ण ढाल तनाव उत्तेजना चिप में प्रत्येक परिपत्र hydrogel बीच यांत्रिक रूपांतरों की तुलना करने के लिए, हम पंक्ति चौड़ाई 0 µL (आंकड़ा 4a) की मात्रा में इंजेक्शन और 40 µL (आंकड़ा 4b), साथ ही चिप्स के दो में एक परिपत्र hydrogel के क्रमशः मापा। प्रत्येक सर्किल में प्रतिशत elongations रेखा चौड़ाई 0 µL-इंजेक्शन चिप (चित्रा 4 सी) में इसी hydrogels के द्वारा elongations 40 µL-इंजेक्शन चिप में विभाजित करके गणना की थे। अनुलंब करार तनाव पार्श्व बढ़ाव तनाव करने के लिए समकक्ष हो जाएगा तो hydrogel एक असंपीड्य सामग्री है। इसलिए, 40-µL इंजेक्शन मात्रा के साथ चिप में प्रतिशत elongations 15-65% बढ़ाव, जो compressive तनाव करने के लिए परिवर्तित किया जा सकता दिखाएँ ( अनुपूरक फ़ाइल 1देखें)।
प्रतिदीप्त सेल नाभिक और F-actin DAPI और phalloidin, साथ के क्रमशः, धुंधला सेलुलर संरेखण का विश्लेषण करने के लिए किया गया था। DAPI धुंधला परमाणु ओरिएंटेशन पर डेटा प्रदान की, और phalloidin धुंधला सेल के प्रसार का आकलन करने के लिए लागू किया गया था। चित्र 5 क -सी कक्ष संरेखण में ढाल तनाव चिप से पता चलता है। 1 लाइन में, 3T3 कोशिकाओं रेडियल दिशा के साथ गठबंधन किया। Hydrogel 7, में कक्षों बेतरतीब ढंग से, और कोशिकाओं पंक्ति 12 में परिपत्र दिशा के साथ संरेखित। फ्लोरोसेंट अनुसार छवियों धुंधला हो जाना, लाइन 1 (रेडियल दिशा में अधिकतम hydrogel बढ़ाव) में 3T3 कक्षों का कक्ष संरेखण के कोण से 90 ° बदलाव संरेखण कोण रेखा 12 (रेडियल दिशा में सबसे कम hydrogel बढ़ाव) में लंबे समय-अक्ष संरेखण के साथ कक्षों के लिए खोज की थी।
पिछले अनुसंधान2,9में, 200-सुक्ष्ममापी hydrogels लाइन-नमूनों में कोशिकाओं hydrogel की लंबी-अक्ष दिशा के साथ संरेखित करने के लिए लक्ष्य। हालांकि, इस अध्ययन में, हम ने कहा कि लघु-अक्ष दिशा में 200 माइक्रोन hydrogels पर लम्बी खिंचाव एक और पहलू को प्रभावित और hydrogel पर तनाव का प्रतिशत नियंत्रित करके सेलुलर संरेखण पर हावी करने के लिए प्रदान की। पंक्ति 1 पर 65% तनाव के लिए, कट्टरपंथी संरेखण hydrogel का बढ़ाव खिंचाव कक्ष संरेखण हावी है कि साबित कर दिया। रेखा 12 पर 15% तनाव के लिए, परिपत्र संरेखण साबित कर दिया कि लंबी-अक्ष प्रभाव कक्ष संरेखण का प्रभुत्व। Hydrogel 7 पर 40% तनाव के लिए, कक्षों बेअसर ज्यामिति मार्गदर्शन और तनाव के प्रभाव के कारण बेतरतीब ढंग से गठबंधन किया।
चित्रा 1 . PMMA माँ मोल्ड PDMS शीट और प्लग निर्माण के लिए. (क) अलग घटकों PMMA मोल्ड एक नीचे की थाली, सीमा फ्रेम, और प्रवाह चैनल सहित, के। डबल पक्षीय टेप के साथ विधानसभा के बाद, (ख) PMMA माँ मोल्ड प्रवाह पत्रक के लिए बनाई है। (c) PDMS प्लग के लिए एक और PMMA मोल्ड इकट्ठा किया है। लाल संख्या गहराई का प्रतिनिधित्व करता है। (इकाई: मिमी) कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 2 . प्लास्टिक Photomask डिजाइन सेल से लदी Hydrogel Micropattern के लिए. वहाँ दो उद्घाटन त्रिकोण आकार (2 मिमी नीचे पंक्ति पर और 6.5 मिमी ऊंचाई में) के साथ कर रहे हैं ताजा सेल संस्कृति मध्यम की आपूर्ति के प्रवाह चैनल के लिए कनेक्ट कर रहा है। (क) प्लास्टिक photomask आयाम के साथ लेबल है। 400 गाढ़ा चक्र की अवधि है 50% समुद्री मील दूर, और कर्तव्य चक्र है। केंद्र वृत्त का व्यास 2 मिमी. है (बी) photomask लेआउट, एक प्लास्टिक की पारदर्शी फिल्म पर लेजर मुद्रण के लिए लेबल के बिना। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
आंकड़ा 3। ढाल की निर्माण प्रक्रिया में एक PDMS फ्लुडिक चिप सेल से लदी Hydrogel रेडियल दिशा के साथ तनाव. (क) एक प्लास्टिक photomask है संरेखित और चिप के तहत TMSPMA में लिपटे फ्लुडिक चैनल के साथ अटक गया। Prepolymer सेल समाधान के साथ एक माइक्रो-सिरिंज चिप के प्रवेश में डाला और प्रवाह चैनल को भरने के लिए लगभग 50 µL इंजेक्ट करने के लिए उपयोग किया जाता है। PDMS (b) प्रवाह चैनल के आउटलेट के साथ बंद कर दिया है प्लग और एक अतिरिक्त 40 µL prepolymer सेल समाधान के इंजेक्शन है। ग्लास नीचे है यूवी-नमूनों के लिए 30 एस करने के लिए प्रवाह चिप में गाढ़ा परिपत्र hydrogel बनाना। (ग) तरल दबाव के प्रवाह चैनल में आउटलेट अनप्लग करके जारी किया गया है और संयुक्त राष्ट्र-crosslinking मिश्रण के साथ DPBS धोया जाता है। (d) कोशिका संवर्धन के लिए तैयार हैं गाढ़ा सेल से लदी hydrogels स्थिर ढाल तनाव के साथ एक चिप पर लागू होता है। यूवी crosslinking प्रक्रिया के दौरान, (ई) एक गैर-निरंतर ढाल ऊंचाई की त्रिज्या के साथ hydrogel का गठन किया है। (च) बाद आउटलेट अनप्लग, PDMS झिल्ली फ्लैट हो जाता है और ग्रैडिएंट तनाव सेल-समझाया hydrogels पर लागू होता है। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
आंकड़ा 4। शुद्ध Hydrogel बढ़ाव ढाल। (क) 0-µL के साथ 3 दिन पर चिप (नियंत्रण समूह) और (ख) 40-µL इंजेक्शन मात्रा बढ़ाव रेखा चौड़ाई और कक्ष encapsulation ढाल में बिना शुद्ध hydrogel का प्रतिशत तनाव। (c) बढ़ाव प्रतिशत रेखा चौड़ाई 40 µL और अंतर 0 µL के मूल्य का 40 µL. रेखा चौड़ाई द्वारा विभाजित करके गणना की जाती है इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 5 . प्रतिदीप्त Actin-नाभिक दाग छवियों 3T3 कोशिकाओं Encapsulated 3 दिन पर ग्रैडिएंट चिप्स में की। (एक-सी) लाइन 1, (d-f) लाइन 7 और (जी-i) पंक्ति 12 में कक्ष संरेखण दिशा प्रकट रेडियल संरेखण, यादृच्छिक संरेखण और परिपत्र संरेखण, क्रमशः। हरे और नीले रंग दिखाने बुलाया और नाभिक दाग, क्रमशः। सफेद बिंदीदार रेखा hydrogel की सीमा का प्रतिनिधित्व करता है। पैमाने पर पट्टी: 200 माइक्रोन. कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
अनुपूरक चित्र 1। PDMS गुंबद के आकार का वक्रता की गणना. H(x): PDMS उलटी; H0: अधिकतम ऊँचाई से पहले और विरूपण के बाद PDMS डोम के बीच अंतर; आर: गुंबद की त्रिज्या; वी: जरूरत से ज्यादा इंजेक्शन की मात्रा नीले क्षेत्र है, जो एक गुंबद के रूप में PDMS विरूपण का कारण बनता है। अनुपूरक फ़ाइल को 1 के लिए विवरण देखें। कृपया इस चित्र डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.
पूरक फ़ाइल 1. कृपया इस फाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.
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Discussion
इस कागज में, हम hydrogel आकृति मार्गदर्शन और तन्यता खिंचाव के बाद कक्ष संरेखण व्यवहार की तुलना करने के लिए एक सरल दृष्टिकोण पर रिपोर्ट। एक लचीला PDMS झिल्ली गाढ़ा परिपत्र hydrogels की विभिन्न ऊंचाइयों पैदा करने के लिए एक गुंबद के आकार का वक्रता बनाता है। दबाव जारी करने के बाद, PDMS झिल्ली स्वचालित रूप से बल ढाल पर तनाव/बढ़ाव, केंद्र पर एक अधिकतम और एक कम से कम बाहरी सीमा के साथ बनाने के लिए माइक्रो-नमूनों hydrogels करने के लिए लागू होता है। ग्रैडिएंट तनाव के गठन लचीला PDMS झिल्ली और फ्लुडिक चिप की हैंडलिंग द्वारा डिज़ाइन किया गया है के रूप में, वहाँ कई महत्वपूर्ण पैरामीटर कि करने के लिए भाग लिया जा चाहिए रहे हैं: (i) PDMS की मोटाई का सटीक नियंत्रण झिल्ली ढाल तनाव मान को समायोजित करने के लिए महत्वपूर्ण है। झिल्ली बहुत मोटी है, तो भी अधिकतम इंजेक्शन मात्रा सेल prepolymer का crosslinking hydrogels सेल-लादेन की ढाल ऊंचाई के लिए PDMS झिल्ली में एक उचित उलटी उत्पन्न करने में सक्षम नहीं होगा। इसके विपरीत, एक बहुत पतली PDMS झिल्ली hydrogels करने के लिए पर्याप्त बल लागू नहीं कर सकता। कृपया जाँच करें कि PDMS कवर मोल्ड में uncured PDMS का वजन लगभग 1.6-2.0 ग्राम प्रति चिप है। (ii) संदूषण निवारण सेल से लदी hydrogel फ्लुडिक चिप में की crosslink हैंडलिंग के दौरान बहुत महत्वपूर्ण है। इनक्यूबेटर में संवर्धन, अच्छी तरह से फ्लुडिक चैनल में निष्फल PBS के साथ कपड़े धोने और 75% का उपयोग कर कक्ष से पहले प्रदूषण समस्या से बचने के लिए इथेनॉल चिप की सतह साफ करने के लिए मदद कर सकते हैं। (iii) photoinitiator की एकाग्रता और यूवी एक्सपोजर की खुराक सावधान होना चाहिए नियंत्रित और रेंज (0.5% की सिफारिश की है) ~0.1% की - 2% में। से अधिक-crosslinking hydrogel और यूवी विकिरण overdosing कम सेल व्यवहार्यता में परिणाम होगा। (iv) लाइन-की चौड़ाई नमूनों hydrogel बहुत बड़ा नहीं होना चाहिए। अन्यथा, मोटी hydrogels में पोषक तत्व प्रतिस्थापन दर सेल प्रसार का समर्थन करने में सक्षम नहीं होगा। आम तौर पर, कम से कम 300 माइक्रोन की सिफारिश की है। दो hydrogel हलकों के बीच की रिक्ति अलग हो सकते हैं, और एक 50% शुल्क साइकिल की सिफारिश की है। (v) जबकि धोने या समाधान के साथ प्रवाह चैनल refilling, बुलबुले के गठन से बचा जाना चाहिए। धीरे pipetting समाधान चिप में बुलबुले को दूर करने के लिए मदद कर सकते हैं।
ग्रैडिएंट PDMS-विकृत वक्रता से उत्पन्न तनाव की अवधारणा आगे गतिशील ढाल उपभेदों को लागू करने के लिए उन्नत किया जा सकता और जैव रासायनिक उत्तेजना, जो कार्यात्मक ऊतक पुनर्जनन पर कई अध्ययन कर सकते हैं लाभ के साथ एकीकृत किया जा सकता। सरल फ्लुडिक इंजेक्शन मॉड्यूल एक PDMS प्लग के साथ विस्तृत प्रयोगात्मक नियंत्रण के लिए किसी भी उन्नत फ्लुडिक प्रणाली द्वारा प्रतिस्थापित किया जा सकता। PMMA मोल्ड भी एक microfabricated सु-8 मोल्ड या एक थोक-etched सिलिकॉन मोल्ड द्वारा प्रतिस्थापित किया जा सकता।
इस ढाल तनाव चिप के साथ एक वृत्ताकार कक्ष से लदी hydrogel बाह्य यांत्रिक या विद्युत मशीनों के बिना 3D hydrogel पर स्थिर compressive शक्ति उत्पन्न कर सकते हैं। इसलिए, यह एक तेजी से स्क्रीनिंग मंच बाह्य मशीनों की प्रक्रिया द्वारा उत्पन्न प्रदूषण समस्याओं के जोखिम के बिना तनाव स्थितियों की एक श्रृंखला में सेल व्यवहार की जांच के लिए प्रदान करता है। PDMS झिल्ली hydrogel की गिरावट तक दबाव उत्पन्न करता है, क्योंकि हालांकि, समय-नियंत्रित तनाव उत्तेजना प्राप्त नहीं है।
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Disclosures
लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है।
Acknowledgments
इस परियोजना को स्नातक छात्र अध्ययन विदेशों में कार्यक्रम (NSC-101-2917-I-007-010 द्वारा) समर्थन था; बायोमेडिकल इंजीनियरिंग प्रोग्राम (NSC-101-2221-E-007-032-MY3); और नैनो राष्ट्रीय कार्यक्रम (NSC-101-2120-M-007-001-), आरओसी, ताइवान के राष्ट्रीय विज्ञान परिषद। लेखक प्रोफ़ेसर अली Khademhosseini, Gulden Camci-Unal, Arghya पॉल, और हार्वर्ड मेडिकल स्कूल में Ronglih लियाओ hydrogel और सेल encapsulation प्रौद्योगिकी साझा करने के लिए शुक्रिया अदा करना चाहूँगा।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 1.5 mL black microcentrifuge tube | Argos Technologies | 03-391-161 | This one can be replaced with a neutral color of 1.5 mL tube covered with aluminun foil |
| 10x DPBS | Sigma-Aldrich | 56064C | |
| Alexa Fluor 488 phalloidin | Invitrogen | A12379 | |
| BSA | Sigma | A1595 | |
| Calcein | Molecular Probe | C1430 | For labeling viable cells |
| CCD | PCO. Imaging | Pixelfly qe | |
| Cell membrane permeating solution | Sigma-Aldrich | X100 | 0.5% Triton X-100 for permeating cell membrane |
| DAPI | Sigma-Aldrich | D8417 | Cell nucleus staining |
| Dialysis membrane | Sigma-Aldrich | D9527 | Molecular weight cut-off = 14,000 |
| DMEM | Gibco | 11995-065 | |
| Double-side tape | 3M | 8003 | |
| FBS | Hyclone | SH30071.03 | |
| Gelatin | Sigma-Aldrich | G2500 | gel strength 300, type A, from porcine skin |
| High frequency electronic corona generator | Electro-technic products | MODEL BD-20 | |
| Methacrylic Anhydride | Sigma-Aldrich | 276685 | |
| Micro syringe | Hamilton | 80501 | 50 μL |
| Microscope | Olympus | IX71 | Include two filter sets: LF405/LP-B-000 and LF488/LP-C-000 from Semrock |
| Oxygen plasma machine | Harrick plasma | PDC-001 | |
| Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | P6148 | For fixing cell |
| PDMS | DOW CORNING | Sylgard 184 | Mixture for PDMS chip cast-molding fabrication |
| Pen-Strep | Gibco | 10378-016 | penicillin/streptomycin |
| Photoinitiator | CIBA | Irgacure 2959 | |
| Propidium iodide | Sigma-Aldrich | P4170 | For labeling dead cells |
| Sterile Filtration cup | Millipore | SCGPT05RE | |
| TMSPMA | Sigma-Aldrich | 440159 | For hydrogel immobilization |
| Ultrasonicator | Delta | D150H | 150W, 43kHz |
| UV light | DAIHAN | WUV-L10 | |
| Freeze Dryer | FIRSTEK | 150311025 | |
| NIH3T3(fibroblast) | Food Industry Research and Development Institute(FIRDI) | 08C0011 | |
| MOXI Z Mini Automated Cell Counter | ORFLO | MXZ001 |
References
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