장기 조절 매체: 전이성 암 연구를 위한 수확된 기관 세포에서 매체를 생성합니다

특정 장기는 용해성 요인을 생성하고 유방암 전이를 위한 우대 사이트가 됩니다. 이러한 수확 된 장기 세포에서 제조 된 조건부 매체는 이러한 요인을 식별하고 연구하는 데 도움이 될 수 있습니다.

감기 PBS를 포함하는 관에 간과 같은 수확된 기관을 놓고 관을 위아래로 뒤집어 장기의 잔류 혈액을 제거하는 것으로 시작합니다. 오르간을 페트리 접시에 담아 놓습니다. 그리고 메스를 사용하여 장기를 작은 조각으로 주사위.

세포 성장을 지원하고 오염을 방지하기 위해 항생제로 보충 된 기저 매질을 포함하는 튜브로 이러한 조각을 다시 중단하십시오. 이제 세포 현탁액을 배양 판에 붓고 필요한 기간 동안 연속 이산화탄소 공급과 함께 섭씨 37도에서 배양하십시오.

잠복하는 동안, 이 세포는 대사 산물, 성장 인자, 세포외 매트릭스 단백질을 매체로 방출합니다. 다음으로, 세포 현탁액을 원심분리기 튜브로 옮기고 신선한 배지를 추가하여 희석시한다. 튜브원심분리기를 조절하는 미디엄인 상체를 신선한 튜브로 필터링합니다.

다음 프로토콜에서는, 우리는 유방암 세포의 전이성 행동을 공부하기 위하여 마우스 폐및 두뇌에서 조건된 매체를 준비할 것입니다.

폐 조절 배지를 생성하려면 폐 조직의 튜브를 세 번 반전하여 장기에서 잔류 혈액을 제거하십시오. 그런 다음 신선한 차가운 PBS로 세척을 교체하고 식염수가 피가 없을 때까지 반복합니다.

다음으로, 폐를 마우스 당 60 평방 밀리미터 유리 페트리 접시로 옮기고 두 개의 멸균 메스 블레이드를 사용하여 반복된 앞뒤로 슬라이스로 조직을 다진다.

조직 단편이 크기로 약 1mm 큐브되면 항생제로 보충된 DMEM/F-12 배지의 적절한 부피로 조각을 다시 중단하고 37°C와 5% CO2에서 마우스 당 6웰 플레이트의 한 우물에서 조직을 배양한다.

24시간 후, 각 우물의 전체 내용을 개별 50밀리리터 원판 튜브로 옮기고 튜브당 3개의 상응하는 양의 신선한 DMEM/F-12 배지로 조건부 미디어를 희석시 합니다.

튜브를 원심분리하여 큰 조직 파편을 제거합니다. 그런 다음 0.22 미크로넨 주사기 스트레이너를 통해 조건부 미디어를 단일 50 밀리리터 원내 튜브로 풀링합니다.