Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
Некоторые органы производят растворимые факторы и становятся преференциальными местами для метастазирования рака молочной железы. Кондиционированная среда, подготовленная из этих собранных клеток органов, может помочь выявить и изучить такие факторы.
Начните с размещения собранного органа, такого как печень в трубке, содержащей холодный PBS и листать трубку вверх и вниз, чтобы удалить остаточную кровь органа. Поместите орган в чашку Петри. И с помощью скальпеля, кости органа на мелкие кусочки.
Повторное использование этих частей в трубку, содержащую базальную среду, дополненную антибиотиком для поддержки роста клеток и предотвращения загрязнения. Теперь, залить клеточной подвески в культуру пластины и инкубировать при 37 градусов по Цельсию с непрерывным запасом двуокиси углерода в течение необходимой продолжительности.
Во время инкубации эти клетки высвобождаются метаболиты, факторы роста, внеклеточные матричные белки в среду. Затем перенесите подвесную клетку в центрифугу и добавьте свежую среду, чтобы разбавить ее. Центрифуга трубки и фильтровать супернатант, который является условным среды, в свежую трубку.
В следующем протоколе, мы подготовим условные средства массовой информации из легких мыши, и мозг для изучения метастатического поведения раковых клеток молочной железы.
Для генерации легких кондиционированной среде, инвертировать трубки легочной ткани в три раза, чтобы удалить остатки крови из органов. Затем замените стирку свежим холодным PBS и повторите, пока солевой раствор не будет без крови.
Затем перенесите легкие в одну стеклянную чашку Петри площадью 60 квадратных миллиметров на мышь и используйте два стерильных лезвия скальпеля, чтобы измельчить ткани с повторной нарезкой взад и вперед.
Когда фрагменты ткани примерно 1 миллиметр куб в размерах, повторно использовать куски в соответствующем объеме DMEM / F-12 среды дополняется антибиотиками и инкубировать ткани в одном хорошо 6-хорошо пластины на мышь при 37 градусов по Цельсию и 5% CO2.
Через 24 часа перенесите все содержимое каждого из них в отдельные 50 миллилитровых конических трубок и разбавьте условные носителя тремя эквивалентными томами свежего DMEM/F-12 среднего на трубку.
Центрифуга труб для удаления любых крупных кусков обломков ткани. Затем объединить условные средства массовой информации через 0,22 микрон шприц ситечко в один 50 миллилитров конической трубки.
