الجهاز المتوسطة مشروطة: توليد المتوسطة من خلايا الأعضاء حصادها لدراسات السرطان النقيلي

تنتج بعض الأعضاء عوامل قابلة للذوبان وتصبح مواقع تفضيلية للانبثاث سرطان الثدي. قد تساعد وسيلة مكيفة معدة من خلايا الأعضاء المحصودة هذه في تحديد ودراسة مثل هذه العوامل.

ابدأ بوضع عضو تم حصاده مثل الكبد في أنبوب يحتوي على برنامج تلفزيوني بارد وقلب الأنبوب صعودا وهبوطا لإزالة الدم المتبقي للعضو. ضع العضو في طبق بيتري. وباستخدام مشرط، نرد الجهاز إلى قطع صغيرة.

إعادة إنفاق هذه القطع في أنبوب يحتوي على وسيط القاعدية تكملها مضاد حيوي لدعم نمو الخلايا ومنع التلوث. الآن، صب تعليق الخلية في لوحة الثقافة واحتضان في 37 درجة مئوية مع إمدادات ثاني أكسيد الكربون المستمر للمدة المطلوبة.

أثناء الحضانة ، تطلق هذه الخلايا الأيضات ، وعوامل النمو ، وبروتينات المصفوفة خارج الخلية في الوسط. بعد ذلك، نقل تعليق الخلية إلى أنبوب الطرد المركزي وإضافة وسيطة جديدة لتمييعه. الطرد المركزي الأنبوب وتصفية supernatant، وهو المتوسطة مشروطة، في أنبوب جديد.

في البروتوكول التالي، سنقوم بإعداد الوسائط المكيفة من رئتي الماوس والدماغ لدراسة السلوك النقيلي لخلايا سرطان الثدي.

لتوليد المتوسطة مكيفة الرئة، عكس أنابيب أنسجة الرئة ثلاث مرات لإزالة أي دم المتبقية من الأعضاء. ثم استبدال الغسيل مع برنامج تلفزيوني بارد الطازجة وكرر حتى المالحة خالية من الدم.

بعد ذلك، نقل الرئتين إلى واحد 60 ملليمتر مربع طبق بيتري الزجاج لكل فأر واستخدام اثنين من ريش مشرط عقيمة لفرم الأنسجة مع تشريح المتكررة ذهابا وإيابا.

عندما شظايا الأنسجة هي ما يقرب من 1 ملليمتر مكعبة في الحجم، وإعادة إنفاق القطع في الحجم المناسب من متوسط DMEM/F-12 تكملها المضادات الحيوية واحتضان الأنسجة في بئر واحد من لوحة 6-جيدا لكل فأر في 37 درجة مئوية و 5٪ CO2.

بعد 24 ساعة، نقل محتويات كل بئر إلى أنابيب مخروطية 50 ملليلتر الفردية وتمييع وسائل الإعلام مشروطة مع ثلاثة أحجام مكافئة من DMEM/F-12 المتوسطة الطازجة لكل أنبوب.

طرد الأنابيب لإزالة أي قطع كبيرة من حطام الأنسجة. ثم تجمع الوسائط المكيفة من خلال مصفاة حقنة 0.22 ميكرون في أنبوب مخروطي واحد 50 ملليلتر.