Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
Visse organer produserer løselige faktorer og blir foretrukne steder for brystkreftmetastase. Et betinget medium fremstilt fra disse høstede organcellene kan bidra til å identifisere og studere slike faktorer.
Begynn med å plassere et høstet organ som en lever i et rør som inneholder kald PBS og snu røret opp og ned for å fjerne orgelets gjenværende blod. Legg orgelet i en Petri-tallerken. Og bruk en skalpell, terning orgelet i små biter.
Resuspend disse stykkene i et rør som inneholder et basal medium supplert med et antibiotika for å støtte cellevekst og forhindre forurensning. Hell nå cellefjæringen i en kulturplate og inkuber ved 37 grader Celsius med en kontinuerlig karbondioksidforsyning for ønsket varighet.
Under inkubasjon frigjør disse cellene metabolitter, vekstfaktorer, ekstracellulære matriseproteiner i mediet. Deretter overfører du cellefjæringen til et sentrifugerør og legger til friskt medium for å fortynne det. Sentrifuger røret og filtrer supernatanten, som er det betingede mediet, inn i et friskt rør.
I følgende protokoll vil vi forberede betingede medier fra musen lunger, og hjernen for å studere metastatisk oppførsel av brystkreftceller.
For å generere det lungekondisjonerte mediet, snu rørene i lungevevet tre ganger for å fjerne gjenværende blod fra organene. Bytt deretter vasken med frisk kald PBS og gjenta til saltvannsvann er blodfri.
Deretter overfører du lungene til en 60 kvadrat millimeter petriskål per mus og bruker to sterile skalpellblader for å hakke vevet med gjentatt frem og tilbake kutting.
Når vevsfragmentene er omtrent 1 millimeter kubet i størrelse, resuspend brikkene i riktig volum av DMEM / F-12 medium supplert med antibiotika og inkubere vevet i en brønn av en 6-brønns plate per mus ved 37 grader Celsius og 5% CO2.
Etter 24 timer, overfør hele innholdet i hver brønn til individuelle 50 milliliter koniske rør og fortynn det betingede mediet med tre tilsvarende volumer av fersk DMEM / F-12 medium per rør.
Sentrifuger rørene for å fjerne store biter av vevsrester. Deretter kan du samle det betingede mediet gjennom en 0,22 mikron sprøytesil i et enkelt konisk rør på 50 milliliter.
