Medio acondicionado de órganos: Generación de medios a partir de células de órganos cosechadas para estudios de cáncer metastásico

Ciertos órganos producen factores solubles y se convierten en sitios preferenciales para la metástasis del cáncer de mama. Un medio acondicionado preparado a partir de estas células de órganos cosechados puede ayudar a identificar y estudiar tales factores.

Comience colocando un órgano cosechado como un hígado en un tubo que contiene PBS frío y volteando el tubo hacia arriba y hacia abajo para eliminar la sangre residual del órgano. Coloque el órgano en una placa de Petri. Y usando un bisturí, corta el órgano en trozos pequeños.

Resuspend estas piezas en un tubo que contiene un medio basal complementado con un antibiótico para apoyar el crecimiento celular y prevenir la contaminación. Ahora, vierta la suspensión celular en una placa de cultivo e incuba a 37 grados Celsius con un suministro continuo de dióxido de carbono durante la duración requerida.

Durante la incubación, estas células liberan metabolitos, factores de crecimiento, proteínas de matriz extracelular en el medio. A continuación, transfiera la suspensión celular a un tubo centrífugo y agregue un medio fresco para diluirla. Centrífuga el tubo y filtre el sobrenadante, que es el medio acondicionado, en un tubo fresco.

En el siguiente protocolo, prepararemos medios condicionados de los pulmones del ratón y del cerebro para estudiar el comportamiento metastásico de las células del cáncer de mama.

Para generar el medio acondicionado pulmonar, invierta los tubos del tejido pulmonar tres veces para extraer cualquier sangre residual de los órganos. A continuación, reemplace el lavado con PBS frío fresco y repita hasta que la solución salina esté libre de sangre.

A continuación, transfiera los pulmones a una placa de Petri de vidrio de 60 milímetros cuadrados por ratón y utilice dos cuchillas estériles del bisturí para picar los tejidos con un corte repetido de ida y vuelta.

Cuando los fragmentos de tejido son aproximadamente 1 milímetro en cubos de tamaño, resuspend las piezas en el volumen adecuado de DMEM / F-12 medio complementado con antibióticos e incubar los tejidos en un pozo de una placa de 6 pozos por ratón a 37 grados Celsius y 5% CO2.

Después de 24 horas, transfiera todo el contenido de cada pozo a tubos cónicos individuales de 50 mililitros y diluya el soporte acondicionado con tres volúmenes equivalentes de medio DMEM/F-12 fresco por tubo.

Centrífuga los tubos para eliminar cualquier pedazo grande de desechos tisulares. A continuación, piscina de los medios acondicionados a través de un colador de jeringa de 0,22 micras en un solo tubo cónico de 50 mililitros.