Milieu conditionné par les organes : Moyen générateur à partir de cellules d’organes récoltées pour des études métastatiques sur le cancer

Certains organes produisent des facteurs solubles et deviennent des sites préférentiels pour les métastases du cancer du sein. Un milieu conditionné préparé à partir de ces cellules d’organes récoltés peut aider à identifier et à étudier de tels facteurs.

Commencez par placer un organe récolté comme un foie dans un tube contenant du PBS froid et en renversant le tube de haut en bas pour enlever le sang résiduel de l’organe. Placer l’orgue dans une boîte de Pétri. Et à l’aide d’un scalpel, couper l’organe en petits morceaux.

Resuspendez ces morceaux dans un tube contenant un milieu basal complété par un antibiotique pour soutenir la croissance cellulaire et prévenir la contamination. Maintenant, versez la suspension cellulaire dans une plaque de culture et couvez à 37 degrés Celsius avec un approvisionnement continu en dioxyde de carbone pour la durée requise.

Pendant l’incubation, ces cellules libèrent des métabolites, des facteurs de croissance, des protéines matricielles extracellulaires dans le milieu. Ensuite, transférez la suspension cellulaire dans un tube de centrifugeuse et ajoutez un milieu frais pour le diluer. Centrifugez le tube et filtrez le supernatant, qui est le milieu conditionné, dans un tube frais.

Dans le protocole suivant, nous préparerons les médias conditionnés des poumons de souris, et du cerveau pour étudier le comportement métastatique des cellules cancéreuses du sein.

Pour générer le milieu conditionné par le poumon, inverser les tubes du tissu pulmonaire trois fois pour enlever tout sang résiduel des organes. Remplacez ensuite le lavage par du PBS froid frais et répétez jusqu’à ce que la solution saline soit sans sang.

Ensuite, transférez les poumons dans une boîte de Pétri en verre de 60 millimètres carrés par souris et utilisez deux lames stériles de scalpel pour hacher les tissus avec des tranchages répétés d’avant en arrière.

Lorsque les fragments de tissu sont d’environ 1 millimètre en cubes de taille, résuspendez les morceaux dans le volume approprié de DMEM/F-12 moyen complété par des antibiotiques et incuber les tissus dans un puits d’une plaque de 6 puits par souris à 37 degrés Celsius et 5% de CO2.

Après 24 heures, transférer l’ensemble du contenu de chaque puits dans des tubes coniques individuels de 50 millilitres et diluer le support conditionné avec trois volumes équivalents de DMEM/F-12 moyen frais par tube.

Centrifugez les tubes pour enlever les gros morceaux de débris tissulaires. Ensuite, mettre en commun le média conditionné à travers une passoire de seringue de 0,22 micron en un seul tube conique de 50 millilitres.