Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
איברים מסוימים מייצרים גורמים מסיסים והופכים לאתרים מועדפים עבור גרורות סרטן השד. מדיום מותנה שהוכן מתאי איברים שנקטפו אלה עשוי לסייע בזיהוי וחקר גורמים כאלה.
התחל על ידי הצבת איבר שנקטף כגון כבד בצינור המכיל PBS קר והיפוך הצינור למעלה ולמטה כדי להסיר את שאריות הדם של האיבר. מניחים את האיבר בצלחת פטרי. ובאמצעות אזמל, קוצצים את האיבר לחתיכות קטנות.
Resuspend חתיכות אלה לתוך צינור המכיל מדיום בסיסי בתוספת אנטיביוטיקה כדי לתמוך צמיחת תאים ולמנוע זיהום. עכשיו, לשפוך את ההשעיה התא לתוך צלחת תרבות דגירה ב 37 מעלות צלזיוס עם אספקת פחמן דו חמצני רציפה למשך הזמן הנדרש.
במהלך הדגירה, תאים אלה משחררים מטבוליטים, גורמי גדילה, חלבוני מטריצה חוץ תאית לתוך המדיום. לאחר מכן, להעביר את המתלה התא לצינור צנטריפוגה ולהוסיף מדיום טרי כדי לדלל אותו. צנטריפוגה הצינור ולסנן את supernatant, שהוא המדיום המותנה, לתוך צינור טרי.
בפרוטוקול הבא, נכין מדיה מותנית מריאות העכבר, והמוח כדי לחקור את ההתנהגות גרורתית של תאים סרטניים בשד.
כדי ליצור את הריאות מותנה בינוני, להפוך את הצינורות של רקמת הריאה שלוש פעמים כדי להסיר את כל שאריות הדם מהאיברים. לאחר מכן להחליף את הכביסה עם PBS קר טרי ולחזור עד מלוחים הוא ללא דם.
לאחר מכן, להעביר את הריאות לתוך אחד 60 מילימטר זכוכית פטרי צלחת לכל עכבר ולהשתמש שני להבי אזמל סטריליים כדי לטחון את הרקמות עם חתך חוזר ונשנה הלוך ושוב.
כאשר שברי הרקמה הם כ 1 מילימטר קוביות בגודל, resuspend את החלקים בנפח המתאים של DMEM / F-12 בינוני בתוספת אנטיביוטיקה דגירה את הרקמות בבאר אחת של צלחת 6 באר לכל עכבר ב 37 מעלות צלזיוס ו 5% CO2.
לאחר 24 שעות, להעביר את כל התוכן של כל באר לתוך צינורות חרוטים בודדים 50 מיליליטר לדלל את המדיה הממוזגת עם שלושה כמויות שוות ערך של DMEM / F-12 בינוני טרי לכל צינור.
צנטריפוגה הצינורות כדי להסיר כל חתיכות גדולות של פסולת רקמה. ואז לאגור את המדיה המותנית דרך מסננת מזרק מיקרון 0.22 לתוך צינור חרוט אחד 50 מיליליטר.
