臓器のコンディショニング培地:転移性癌研究のための収穫された臓器細胞からの培地の生成

ある臓器は、可溶性因子を産生し、乳癌転移の優先部位となる。これらの収穫された器官細胞から調製された調整された培地は、そのような要因を同定し、研究するのに役立つかもしれない。

まず、肝臓などの収穫された器官を冷たいPBSを含むチューブに入れ、チューブを上下に反転させて臓器の残留血液を取り除くことから始めます。ペトリ皿にオルガンを入れます。そして、メスを使用して、小片に臓器をサイコロ。

これらの部分を、細胞の成長をサポートし、汚染を防ぐために、抗生物質を添加した基底培地を含むチューブに再中断します。次に、細胞懸濁液を培養プレートに注ぎ、必要な期間連続的な二酸化炭素供給で摂氏37度でインキュベートします。

インキュベーション中、これらの細胞は代謝産物、増殖因子、細胞外マトリックスタンパク質を培地中に放出する。次に、細胞懸濁液を遠心分離管に移し、新鮮な培地を加え、希釈します。チューブを遠心分離し、調整された媒体である上清を新鮮なチューブにフィルターします。

以下のプロトコルでは、マウス肺からコンディショネされた培地、および脳を準備して乳がん細胞の転移行動を研究する。

肺調整培地を生成するには、肺組織の管を3回反転させて臓器から残留血液を除去する。その後、新鮮な冷たいPBSで洗浄を交換し、生理焼失が起きるまで繰り返します。

次に、マウス1匹につき1つの60平方ミリメートルガラスペトリ皿に肺を移し、2つの無菌メスの刃を使用して、繰り返しスライスして組織をミンチします。

組織断片の大きさが約1ミリメートルの場合は、抗生物質を添加したDMEM/F-12培地の適切な体積で片を再中断し、摂氏37度と5%CO2でマウスあたり6ウェルプレートの1ウェルで組織をインキュベートします。

24時間後、各ウェルの内容物全体を個々の50ミリリットル円錐形チューブに移し、チューブあたり3つの同等の量の新鮮なDMEM / F-12培地で調整された培地を希釈します。

チューブを遠心分離して、大きな組織の破片を取り除きます。その後、0.22ミクロンのシリンジストレーナーを介して、単一の50ミリリットル円錐形チューブに調整された培地をプールします。