Organ konditioneret Medium: Generering Medium fra høstede organceller til metastatisk cancer undersøgelser

Visse organer producerer opløselige faktorer og bliver præferencesteder for brystkræftmetastase. Et konditioneret medium fremstillet af disse høstede organer celler kan hjælpe med at identificere og studere sådanne faktorer.

Begynd med at placere et høstet organ som en lever i et rør, der indeholder kold PBS og vende røret op og ned for at fjerne organets resterende blod. Placer orgelet i en petriskål. Og ved hjælp af en skalpel, terninger orgelet i små stykker.

Resuspend disse stykker i et rør, der indeholder en basal medium suppleret med et antibiotikum til at støtte cellevækst og forhindre forurening. Hæld nu celleaffjedringen i en dyrkningsplade og inkubat ved 37 grader Celsius med en kontinuerlig kuldioxidforsyning i den krævede varighed.

Under inkubation frigiver disse celler metabolitter, vækstfaktorer, ekstracellulære matrixproteiner i mediet. Dernæst overføres celleaffjedringen til et centrifugerør og tilsæt frisk medium for at fortynde det. Centrifuge røret og filtrere supernatant, som er konditioneret medium, i et frisk rør.

I den følgende protokol vil vi forberede konditionerede medier fra musens lunger og hjerne til at studere brystkræftcellernes metastatiske adfærd.

For at generere lunge konditioneret medium, invertere rør af lungevæv tre gange for at fjerne eventuelle resterende blod fra organerne. Udskift derefter vasken med frisk kold PBS og gentag, indtil saltvandet er blodfrit.

Dernæst overføre lungerne i en 60 kvadrat millimeter glas Petri parabol per mus og bruge to sterile skalpelblade til at hakke væv med gentagne frem og tilbage udskæring.

Når vævsfragmenterne er ca. 1 millimeter kubik i størrelse, genbruges stykkerne i det passende volumen af DMEM/ F-12 medium suppleret med antibiotika og inkuberer vævene i en brønd af en 6-brønds plade pr. Mus ved 37 grader Celsius og 5% CO2.

Efter 24 timer overføres hele indholdet af hver brønd til individuelle 50 milliliter koniske rør, og det betingede medie fortyndes med tre tilsvarende mængder frisk DMEM/F-12 medium pr. rør.

Centrifuge rørene for at fjerne store stykker vævsrester. Derefter samles det betingede medie gennem en 0,22 mikron sprøjte si i en enkelt 50 milliliter konisk rør.