Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
Zebravis embryo xenografts zijn nuttig bij het bestuderen van kankercelinvasie. Bereid xenograftmodellen voor door fluorescerend gelabelde gemetastaseerde kankercellen en niet-kankercellen in de perivitellineruimte van twee transgene embryo's te injecteren. De perivitellineruimte is een ruimte tussen het embryo-periderm en de dooierzak. Laat embryo's groeien voor de gewenste periode.
Tijdens deze periode delen gemetastaseerde kankercellen zich agressief op de injectieplaats, terwijl niet-kankercellen stabiel blijven. Gebruik na incubatie een pasteurpipet om embryo's over te brengen in een suspensieschaal met glazen bodem. Verwijder overtollig eiwater en plaats embryo's in de gewenste positie voor beeldvorming. Houd een afdeklip op de schaal en plaats de schotel onder een heldere veldmicroscoop.
Leg beelden vast en analyseer het invasieve gedrag van beide soorten cellen. Gemetastaseerde kankercellen hebben de neiging om bloedvaten binnen te dringen vanaf de injectieplaats. Ze bewegen langs de circulatie en dringen dan binnen in het omliggende weefsel om zich te verspreiden. Daarentegen blijven de niet-kankercellen op de injectieplaats. In het voorbeeldprotocol injecteren we borstkankercellen in de perivitellineruimte en het kanaal van Cuvier in zebravis xenograftmodellen om uitzaaiingen te bestuderen.
Om uitzaaiingen te visualiseren, breng je met een pasteurpipet het geïnjecteerde zebravisembryo over naar een polystyreenschaal met glazen bodem en verwijder je overtollig eiwater. Beeld het hele lichaam van het embryo met een confocale microscoop ingesteld op lage vergroting om een algemeen patroon van tumorcelverspreiding te verkrijgen.
Gebruik een 488 nanometer laser om de zebravis embryo vasculatuur te visualiseren en een 543 nanometer laser om geïmplanteerde tumorcellen gelabeld met rode fluorescerende marker te visualiseren. Scan vervolgens het embryo in acht tot tien stappen om een beeld van hoge kwaliteit te krijgen.
