zPDX-侵襲性解析:ゼブラフィッシュ胚異種移植片における転移性癌細胞の侵襲的挙動の研究

ゼブラフィッシュ胚異種移植片は、がん細胞の浸潤を研究するのに有用である。蛍光標識された転移性癌細胞および非癌細胞を2つのトランスジェニック胚の膜膜空間に注入することによって異種移植片モデルを調製する。ペリビテリン空間は、胚ペライダーと黄身嚢の間の空間である。胚は所望の期間に成長させましょう。

この期間中、転移性癌細胞は、非癌細胞が安定したまま、注射部位で積極的に分裂する。インキュベーション後、パスツールピペットを使用して胚をガラス底懸濁皿に移します。余分な卵の水を取り除き、イメージングのために所望の位置に胚を配置します。皿の上にカバースリップを保ち、明るいフィールド顕微鏡の下に皿を置きます。

画像をキャプチャし、両方のタイプの細胞の侵襲的な行動を分析します。転移性癌細胞は、注射部位から血管に侵入する傾向がある。彼らは循環に沿って移動し、その後、増殖するために周囲の組織に侵入します。対照的に、非癌細胞は注射部位に残っている。このプロトコル例では、ゼブラフィッシュ異種移植モデルのCuvierの胸壁空間とダクトに乳がん細胞を注入し、転移を研究します。

パスツールピペットを使用して転移を視覚化するには、注入したゼブラフィッシュ胚をガラス底ポリスチレン皿に移し、余分な卵水を取り除きます。共焦点顕微鏡を用いて胚の全身を低倍率に設定し、腫瘍細胞播種の一般的なパターンを得る。

488ナノメートルレーザーを使用してゼブラフィッシュ胚脈管構造を視覚化し、543ナノメートルレーザーを使用して、赤い蛍光マーカーで標識された埋め込み腫瘍細胞を視覚化します。次に、胚を8〜10ステップでスキャンして、高品質の画像を取得します。