zPDX-Análise da Invasividade: Investigando o Comportamento Invasivo de Células cancerígenas metastáticas em xenoenxertos de embrião de zebrafish

Xenoenxertos de embrião de zebrafish são úteis no estudo da invasão de células cancerosas. Prepare modelos de xenoenxerto injetando células cancerígenas metastáticas fluorescentes e células não cancerosas no espaço perivitelline de dois embriões transgênicos. O espaço perivitelline é um espaço entre o periderm embrião e o saco de gema. Deixe os embriões crescerem pelo período desejado.

Durante esse período, as células cancerígenas metastáticas se dividem agressivamente no local da injeção, enquanto as células não cancerosas permanecem estáveis. Após a incubação, use uma pipeta pasteur para transferir embriões para um prato de suspensão de fundo de vidro. Remova o excesso de água dos ovos e posicione os embriões na posição desejada para a imagem. Mantenha um deslizamento de cobertura em cima do prato e coloque o prato sob um microscópio de campo brilhante.

Capturar imagens e analisar o comportamento invasivo de ambos os tipos de células. Células cancerígenas metastáticas tendem a invadir vasos sanguíneos do local da injeção. Eles se movem ao longo da circulação, e depois invadem o tecido circundante para proliferar. Em contraste, as células não cancerígenas permanecem no local da injeção. No protocolo de exemplo, injetaremos células cancerígenas de mama no espaço perivitelline e no ducto de Cuvier em modelos de xenoenxerto de zebrafish para estudar metástase.

Para visualizar a metástase, com uma pipeta pasteur, transfira o embrião de zebrafish injetado para um prato de poliestireno de fundo de vidro e remova o excesso de água dos ovos. Imagem de todo o corpo do embrião com um microscópio confocal definido para baixa ampliação para obter um padrão geral de disseminação de células tumorais.

Use um laser de 488 nanômetros para visualizar a vasculatura do embrião de zebrafish e um laser de 543 nanômetros para visualizar células tumorais implantadas rotuladas com marcador fluorescente vermelho. Em seguida, escaneie o embrião em oito a dez passos para adquirir uma imagem de alta qualidade.