zPDX-analys av invasivitet: Undersöka invasivt beteende hos metastaserade cancerceller i zebrafiskembryon Xenografts

Zebrafiskembryon xenografter är användbara för att studera cancercellsinvasion. Förbered xenograftmodeller genom att injicera fluorescerande märkta metastaserande cancerceller och icke-cancerceller i det perivitelliniska utrymmet hos två transgena embryon. Det perivitelliniska utrymmet är ett utrymme mellan embryoperdermen och äggulasäcken. Låt embryon växa under önskad period.

Under denna period delar metastaserade cancerceller aggressivt i injektionsstället medan icke-cancerceller förblir stabila. Efter inkubation, använd en pastörpipett för att överföra embryon till en glasbottens suspensionsfat. Ta bort överflödigt äggvatten och placera embryon i önskat läge för avbildning. Håll en täckspill ovanpå skålen och placera skålen under ett ljust fältmikroskop.

Ta bilder och analysera det invasiva beteendet hos båda typerna av celler. Metastaserade cancerceller tenderar att invadera blodkärl från injektionsstället. De rör sig längs cirkulationen och invaderar sedan in i den omgivande vävnaden för att sprida sig. Däremot finns de icke-cancercellerna kvar på injektionsstället. I exempelprotokollet kommer vi att injicera bröstcancerceller i det perivitelline utrymmet och kanalen av Cuvier i zebrafish xenograft modeller för att studera metastasering.

För att visualisera metastasering, med en pastörpipett, överför det injicerade zebrafiskembryon till en glasbottenpolystyrenrätt och ta bort överflödigt äggvatten. Avbilda hela embryots kropp med ett konfokalt mikroskop inställt på låg förstoring för att få ett allmänt mönster av tumörcellsspridning.

Använd en 488 nanometers laser för att visualisera zebrafiskembryonvaskulaturen och en 543 nanometers laser för att visualisera implanterade tumörceller märkta med röd fluorescerande markör. Skanna sedan embryot i åtta till tio steg för att få en högkvalitativ bild.