Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
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जेब्राफिश भ्रूण xenografts कैंसर सेल आक्रमण का अध्ययन करने में उपयोगी होते हैं। दो ट्रांसजेनिक भ्रूण के पेरिविटेललाइन अंतरिक्ष में फ्लोरोसेंटी लेबल मेटास्टैटिक कैंसर कोशिकाओं और गैर-कैंसर कोशिकाओं को इंजेक्ट करके ज़ेनोग्रेफ्ट मॉडल तैयार करें। पेरिविटेललाइन स्पेस भ्रूण पेरिडर्म और जर्दी थैली के बीच एक जगह है। भ्रूण वांछित अवधि के लिए बढ़ने दें।
इस अवधि के दौरान, मेटास्टैटिक कैंसर कोशिकाएं इंजेक्शन साइट में आक्रामक रूप से विभाजित होती हैं जबकि गैर-कैंसर कोशिकाएं स्थिर रहती हैं। इनक्यूबेशन के बाद, एक गिलास नीचे निलंबन पकवान में भ्रूण हस्तांतरण करने के लिए एक पाश्चुर पिपेट का उपयोग करें । इमेजिंग के लिए वांछित स्थिति में अतिरिक्त अंडे का पानी और स्थिति भ्रूण निकालें। डिश के ऊपर कवर स्लिप रखें और डिश को ब्राइट फील्ड माइक्रोस्कोप के नीचे रखें ।
छवियों को कैप्चर करें और दोनों प्रकार की कोशिकाओं के आक्रामक व्यवहार का विश्लेषण करें। मेटास्टैटिक कैंसर कोशिकाएं इंजेक्शन साइट से रक्त वाहिकाओं पर आक्रमण करती हैं। वे परिसंचरण के साथ चलते हैं, और फिर आसपास के ऊतकों में आक्रमण करने के लिए पैदा करते हैं । इसके विपरीत, गैर कैंसर कोशिकाओं इंजेक्शन की साइट पर रहते हैं । उदाहरण प्रोटोकॉल में, हम मेटास्टेसिस का अध्ययन करने के लिए जेब्राफिश ज़ेनोबेड़ा मॉडल में पेरिविटेललाइन अंतरिक्ष और क्यूवियर की डक्ट में स्तन कैंसर कोशिकाओं को इंजेक्ट करेंगे।
मेटास्टेसिस की कल्पना करने के लिए, एक पाश्चर पिपेट के साथ, इंजेक्शन जेब्राफिश भ्रूण को एक ग्लास बॉटनीर डिश में स्थानांतरित करें और अंडे के अतिरिक्त पानी को हटा दें। छवि एक कॉन्फोकल माइक्रोस्कोप के साथ भ्रूण के पूरे शरीर ट्यूमर सेल प्रसार का एक सामान्य पैटर्न प्राप्त करने के लिए कम आवर्धन के लिए सेट।
लाल फ्लोरोसेंट मार्कर के साथ लेबल प्रत्यारोपित ट्यूमर कोशिकाओं की कल्पना करने के लिए जेब्राफिश भ्रूण वास्कुलेचर और एक 543 नैनोमीटर लेजर की कल्पना करने के लिए एक 488 नैनोमीटर लेजर का उपयोग करें। इसके बाद, एक उच्च गुणवत्ता वाली छवि प्राप्त करने के लिए आठ से दस चरणों में भ्रूण को स्कैन करें।
